[发明专利]一种猪肚菇低温型菌株选育方法

说明书

技术领域

本发明属于食用菌育种领域，特别涉及一种猪肚菇低温型菌株选育方法。 

背景技术

在食用菌生产中，优良菌种的选用是实现优质高产的基本前提。优良食用菌品种是保证食用菌产业稳步、健康发展的基础。 

食用菌育种技术的研究，近十几年发展相当迅速。无论在野生食用菌驯化方面，还是在栽培食用菌的育种研究方面均有重要进展，但是现有的食用菌育种规模和技术水平都还远远不能满足食用菌生产迅猛发展的需要。 

食用菌的育种方法主要包括选择育种、杂交育种和诱变育种等常规育种技术以及利用原生质体技术和分子生物学技术为手段的现代育种新技术，其中杂交育种最为常见，也最为重要。 

高产、优质、抗逆性强和适应性好是食用菌育种的最基本目标。不过，随着食用菌产业不断向深度和广度发展，对食用菌育种也提出了更高的要求。有时，人们为了解决某一些特殊问题，会相应地制定一些特殊的育种目标。 

拓宽食用菌菌丝发育和出菇的适应温度，使之可以在更广泛的地方栽培。亚洲的两大主要栽培食用菌——香菇（Lentinula edodes）和 草菇（Volvariella volvacea），菇肉细嫩，味道鲜美，颇受市场欢迎。前者主要在温带栽培，通常在20℃以上即难以出菇。后者是典型的热带、亚热带菇类，一般在28℃以下即停止出菇。如果能育成突破出菇上限的“高温型”香菇品种和突破出菇下限的“低温型”草菇品种，那么，香菇“南下”及草菇“北上”的范围将进一步扩大。 

目前在低温型草菇菌株选育有一些报道，而其他高温型食用菌鲜有技术报道。野生猪肚菇（Panus giganteus）分布在我国广东、福建、湖南、海南和浙江等省以及东南亚和大洋洲等热带及亚热带地区，菌丝生长最适温度26–28℃，子实体发育温度23–32℃。其菌丝生长阶段偏向中温型，而子实体发育阶段却属高温型。大规模地利用各种廉价的基质和废物来生产食用菌已被确认为是通过生物的作用，将粗纤维转变为人类可以食用的优质蛋白的一种重要途径。目前猪肚菇的研究报道和栽培推广主要是在我国的福建和浙江等南方省展开，当地每年5-9月份适宜出菇，但是在北方生产猪肚菇的适宜自然气候时间较短，目前尚无适宜在北方地区栽培的猪肚菇菌株，在猪肚菇低温选育方面也鲜有报道。 

发明内容

为解决上述现有技术存在的问题，为了选育适宜在北方地区栽培的猪肚菇菌株，也就是出菇温度较低的菌株，本发明提出了一种猪肚菇低温型菌种选育方法，采用低温驯化和杂交育种的方法选育低温型猪肚菇菌株，对猪肚菇的育种方法进行试探，探索低温型菌株的选育方法，并且为进一步推广栽培提供低温型菌株。 

为达到上述目的，本发明的技术方案为： 

一种猪肚菇低温型菌种选育方法，包括如下步骤： 

步骤一、筛选在20℃下出菇的猪肚菇子实体分离单孢子； 

步骤二、采用低温驯化猪肚菇单核菌株，选出在较低温度下生长快的单核菌株； 

步骤三、通过杂交育种，选育出低温型杂交菌株； 

步骤四、通过拮抗试验和分子标记技术对选育杂交菌株进行鉴定。 

所述步骤一的详细步骤为： 

1）子实体培养：选取棉籽壳83%，麸皮15%，石灰2%，含水量63%作为栽培培养基，将培养基按照配方拌料、装袋，灭菌、接种和培养，菌丝满袋后移入塑料菇棚采用袋内覆土出菇，覆土厚度3－4cm，菇棚每天定时通风，喷水保湿，常规方法进行出菇管理； 

2）分离单孢子实体的获得：每天观察菇棚温度的变化，当温度较低时观察不同菌株的子实体生长情况，在菇棚温度20℃时选取仍然发生的子实体，采下子实体用于分离单孢； 

3）单孢子分离：采用常规稀释法分离单孢，在收集有孢子的玻璃瓶中加入灭菌的玻璃珠数十粒，加入无菌水剧烈振荡稀释孢子液；同时用血球计数板计数，选取PDA培养基：马铃薯（去皮）200g，葡萄糖20g，琼脂20g，水1000mL；采用梯度稀释涂布100μl孢子浓度10³个/mL的孢子液到PDA平板上；试验时为防止细菌污染在培养基中添加500mg/L卡那霉素。 

所述步骤二的详细步骤为： 

1）低温驯化处理：将涂有孢子的平板置于25℃恒温培养，定期观察孢子萌发情况，当孢子萌发出现肉眼可见的微小白点时，置于4℃冰箱低温驯化45d，然后在无菌条件下将低温驯化处理的单孢挑取至PDA平板上，置于20℃恒温培养；