[发明专利]一种消渴清制剂的指纹图谱检测方法

说明书

技术领域：

本发明涉及一种药物的有效成分测定方法，特别涉及一种消渴清制剂的指纹图谱检测方法。

背景技术：

消渴清颗粒为一种已经上市的治疗糖尿病的中成药，其配方组成如下：知母、苍术、黄连、蒲黄、地锦草、以及适量辅料，其制备方法包括以下步骤：

(a)取知母、苍术、黄连、蒲黄、地锦草备用；

(b)苍术用水蒸气蒸馏法提取挥发油5小时，将苍术挥发油用β-环糊精包合，苍术油与β-环糊精按1∶6投料，在50℃干燥，制得β-环糊精包合物备用，提取液滤过，得滤液1；

(c)知母、黄连、蒲黄、地锦草以及苍术水提后的残渣加8倍量水煎煮两次，第一次煎煮2小时，第二次煎煮1小时，合并两次煎液，过滤得滤液2，合并滤液1与2，浓缩滤液成比重为1.10～1.15的清膏，干燥得干浸膏；

(d)：上述干浸膏及挥发油包合物，充分混合，即得药物活性物质，进一步和药物可接受的辅料混合制成颗粒等制剂形式。

消渴清颗粒中，各味药起着不同的功效，其中，苍术辛苦温，入脾胃二经，气味芳香，善行而不守，既可燥湿健脾，又能行气开郁，故朱丹溪谓其：“苍术为足阳明经药，气味辛烈，强胃健脾发谷之气”，“能解诸郁”。知母甘寒，入肺、胃、肾经，具有滋阴降火，清热润燥之功，《本草纲目》认为，“知母下则润胃燥而滋阴，上则清肺金而泻火。”，《本经》谓“主消渴热中，除邪气。”，二药皆为君，二药相互配伍，共行滋肾阴，健脾运，化郁之功；黄连气味苦寒，具有清热燥湿，泻火解毒，以之为臣，辅知母以护肾阴，助苍术以化湿浊；生蒲黄性凉味甘辛，入心、肝二经，凉血化瘀，血行津布而燥热可解，瘀去气行，而阴津自生，且能改善糖尿病合并心脑血管病变，以之为佐；地锦草乃民间天然降糖妙品，味微苦辛而性平，清热解毒，活血通脉不仅善降血糖，且对糖尿病并发痈疽疮疖也有良效，以之为使，诸药合用，则共奏滋阴清火，健脾活血之功，诸症可缓解而愈之。以上诸药，按照中医方剂学的基础理论，巧妙配伍，严密组合，共奏滋阴降火、清热化湿、活血化瘀之功，从而达到向愈的目的。

消渴清颗粒（XiaoKeQing granules，XKQ）是由知母、苍术、黄连、蒲黄及地锦草5味药组成。中国专利：200310107286，200410048002.4公开了有关的配方和制备。

由于中药化学成分复杂，作用机制不明确，致使现有中药制药技术难以确保中药产品质量稳定性，中药指纹图谱建立的可以全面反映中药内在化学成分的种类与数量，进而反映中药的质量。现阶段中药的有效成分绝大多数没有明确，采用中药指纹图谱的方式，将有效地表征中药质量。指纹图谱已为国际社会所认可，有利于中药及产品进入国际市场。

目前，消渴清颗粒质量标准中不曾对制剂进行过指纹图谱研究，单纯的以制剂中几种成分的含量来表征制剂质量是不全面的，而指纹图谱能充分表征中药制剂的整体性和复杂性，因此我们实验室对消渴清颗粒的有效成分进行了提取，分别以芒果苷和知母皂苷BII为参照峰，确定了23个紫外检测共有指纹峰和10个蒸发光检测共有指纹峰。

本发明将将超高效液相技术应用于消渴清颗粒研究出了一种消渴清颗粒的测定方法，所述方法一定条件下测定消渴清颗粒，以获得其指纹图谱，通过获得的图谱和标准指纹图谱的比较，确定消渴清颗粒的质量是否符合标准，

发明内容：

本发明提供一种消渴清制剂的超高效液相标准对照指纹图谱，其获得方法如下：

1）供试品溶液制备：

取消渴清制剂，加入提取溶剂一定比例的甲醇或乙醇水溶液，超声溶解，再加入溶剂调整溶液浓度，微孔滤膜滤过，取滤液，既得；

2）获得色谱图：

供试品溶液注入超高效液相色谱仪，得到色谱图；

3）生成对照指纹图谱

选择合格的多批消渴清制剂色谱图导入中国药典委的“中药色谱指纹图谱相似度评价系统A版”软件，计算得相似度结果，并生成标准对照指纹图谱；

色谱条件如下：

色谱柱：选择UPLC C18或T3柱；

流动相选自以下流动相中的一种：

溶剂A（醋酸盐缓冲溶液（含0.3-0.5%乙酸及0.05-0.1%三乙胺））–溶剂B（乙腈）

溶剂A（0.1%甲酸水溶液）–溶剂B（乙腈）；

溶剂A（0.1%醋酸水溶液）–溶剂B（乙腈）梯度洗脱。

采用梯度洗脱进行洗脱，所述梯度洗脱：选自以下四个不同的洗脱方案中的一种：