[发明专利]检测基因表达量的引物、探针和试剂盒、及其使用方法

权利要求书

1.一种引物和探针，其特征在于，所述引物的序列如下：

SEQ ID NO:15’-ATGGCCCTCACGGAGTTTTGT-3’

SEQ ID NO:25’-CATCTGGGCACTGAAAGGGA-3’

SEQ ID NO:35’-ACTAGCTGATGCATGTGA-3’

SEQ ID NO:45’-TCCATAACAAATTCTGGATTCG-3’

SEQ ID NO:55’-GCGGGAGGGATTTGGATT-3’

SEQ ID NO:65’-GGAAGGGTGGTTCCAGGC-3’

SEQ ID NO:75’-GAGGCGGTGGAGCACATTT-3’

SEQ ID NO:85’-CGTTTGTTGTGAGCAGAGG-3’

所述探针两端分别标记荧光报告基团和荧光淬灭基团，所述探针的序列如下，其中，R表示荧光报告基团，Q表示荧光淬灭基团：

SEQ ID NO:115’-R-ACGCCCTAGCTCACTCCCCT-Q-3’

SEQ ID NO:125’-R-GCCGCCAAGAAAGTCATGTTTGA-Q-3’

SEQ ID NO:135’-R-AAAGTTGTCTGGCTCCAA-Q-3’

SEQ ID NO:145’-R-CTGGCACCTGTCGGTGTT-Q-3’。

2.一种包括有权利要求1所述的引物和探针的试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括：

1）ERCC1、RRM1、TUBB3和TYMS基因检测的引物和探针，其中，引物序列如SEQ ID NO:1～SEQ ID NO:8所示，探针序列如SEQ ID NO:11～SEQ ID NO:14所示；

2）内参基因的引物和探针；

3）内参基因、ERCC1、RRM1、TUBB3和TYMS基因的标准品，所述标准品为分别含有内参基因、ERCC1、RRM1、TUBB3和TYMS基因编码序列的重组质粒载体；

4）实时荧光定量PCR MIX反应液、去离子水；

5）分隔并集中包装上述试剂的瓶或管以及包装盒。

3.按照权利要求2所述的试剂盒，其特征在于：所述内参基因为ATCB基因，所述ATCB基因的引物序列如SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:10所示，探针序列如SEQ ID NO:15所示，所述探针两端分别标记荧光报告基团和荧光淬灭基团。

4.按照权利要求2所述的试剂盒，其特征在于：引物和探针的浓度均为5～10μmol/L。

5.按照权利要求2所述的试剂盒，其特征在于：步骤3）所述的含有内参基因、ERCC1、RRM1、TUBB3和TYMS基因序列质粒载体的空载体为pGEM-T载体。

6.按照权利要求2所述的试剂盒，其特征在于：所述实时荧光定量PCRMIX反应液为Takara公司的PrimeScript^TMRT Master Mix。