[发明专利]一种对含有GFP基因的表达载体进行构建的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种生化实验室的试验方法，具体来说一种对含有GFP基因的表达载体进行构建的方法。 

背景技术

 质粒（Plasmid）是附加到细胞中的非细胞的染色体或核区DNA原有的能够自主复制的较小的DNA分子（即细胞附殖粒、又胞附殖粒）。大部分的质粒虽然都是环状构形，然而目前也发现有少数的质粒属于线性构形，它存在于许多细菌以及酵母菌等生物中，乃至于植物的线粒体等胞器中。天然质粒的DNA长度从数千碱基对至数十万碱基对都有。质粒天然存在于这些生物里面，有时候一个细胞里面可以同时有一种乃至于数种的质粒同时存在。质粒的套数（copy number）在细胞里从单一到数千都有可能。有时有些质粒含有某种抗药基因（如大肠杆菌中就有含有抗四环素基因的质粒）。有一些质粒携带的基因则可以赋予细胞额外的生理代谢能力，乃至于在一些细菌中提高它的致病力。一般来说，质粒的存在与否对宿主细胞生存没有决定性的作用。它是基因工程最常见的运载体。 

发明内容

为克服上述技术问题，我们提出了以下技术方案： 

一种对含有GFP基因的表达载体进行构建的方法，步骤如下：首先，酶切质粒，具体为单酶切质粒，在35-36摄氏度的恒温下进行水浴，时间至少为2小时，最多5小时；用百分比不超过百分之一点五的琼脂糖凝胶电泳进行检测，胶回收线性化比较大的片对，然后对其进行末端补平；末端补平：即将回收的部分混合，然后用离心机进行甩干离心，65摄氏度的条件下进行温育，时间不少于十分钟；用无水乙醇，在零下二十度的环境下进行预冷后，放置至少30分钟；告诉离心；弃掉上清；使用TE溶解上述步骤产生的沉淀；单酶切质粒，点用检测并胶回收片段，即构建所需质粒。

本发明中, 所述无水乙醇，需要为补平后体积的3-4倍，之前需要放置在室温下进行静置。本发明的有益效果是，成本较低、重复性好，与预期相符，说明质粒构建的合理性和成果性。 

具体实施方式

一种对含有GFP基因的表达载体进行构建的方法，步骤如下：首先，酶切质粒，具体为单酶切质粒，在35-36摄氏度的恒温下进行水浴，时间至少为2小时，最多5小时；用百分比不超过百分之一点五的琼脂糖凝胶电泳进行检测，胶回收线性化比较大的片对，然后对其进行末端补平；末端补平：即将回收的部分混合，然后用离心机进行甩干离心，65摄氏度的条件下进行温育，时间不少于十分钟；用无水乙醇，在零下二十度的环境下进行预冷后，放置至少30分钟；告诉离心；弃掉上清；使用TE溶解上述步骤产生的沉淀；单酶切质粒，点用检测并胶回收片段，即构建所需质粒；所述无水乙醇，需要为补平后体积的3-4倍，之前需要放置在室温下进行静置。 

以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明披露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。