[发明专利]一种大黄鱼原肌球蛋白基因及其重组蛋白与应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种原肌球蛋白（Tropmyosin），尤其是涉及一种大黄鱼原肌球蛋白基因及其重组蛋白与应用。

背景技术

大黄鱼是我国海水网箱养殖量最大的鱼类，素有“海水国鱼”之称，年产量8万吨，年产值40多亿元。但是目前大黄鱼的养殖受到多种疾病的严重威胁，对于养殖大黄鱼病害的控制，目前主要依靠化学药物和抗生素，由此造成了病原菌抗药性增加、养殖产品中药物残留、环境污染和出口受阻等一系列问题。

原肌球蛋白（Tropmyosin）是1948年发现的一种骨架蛋白，是由α-螺旋结构和卷曲螺旋结构构成的纤维蛋白质[Smillie I B.Structure and functions of Tropmyosins from muscle and nonmuscle sources[J].Trends Biochen Sci.1979,4:151-155]。原肌球蛋白（Tropmyosin）是肌肉收缩过程中重要的调节蛋白质，它在细肌丝中与肌动蛋白（Actin）双螺旋并行存在，可影响并调控肌动球蛋白之间的相互作用，在细胞移动、形态发生和胞浆移动中调节肌动蛋白丝的动态变化[K,Gellhaar S,Heim B,et al.LRRK2guides the actin cytoskeleton at growth cones together with ARHGEF7and Tropmyosin4[J].Biochim Biophys Acta.2013,4439(13):288-293]。原肌球蛋白（Tropmyosin）家族序列高度保守，存在于肌肉和非肌肉细胞，也存在于多种器官和组织。大量研究发现，原肌球蛋白（Tropmyosin）是引发食用鱼、虾、蟹后导致食物过敏的主要致敏原[Nakano S,Yoshinuma T,Yamada T.Reactivity of shrimp allergy related IgE antibodies to krill Tropmyosin[J].In t A r c h A l l e r g y l mm u n o l.2008,145(3):175-181]。在人类疾病研究方面，现已发现原肌球蛋白（Tropmyosin）基因的突变与多种疾病特别是许多癌症的发生有关[Malfatti E,Schaeffer U,Chapon F,et al.Combined cap disease and nemaline myopathy in the same patient caused by an autosomal dominant mutation in the TROPMYOSIN3gene[J].Neuromuscul Disord.2013,8966(13):546-554]。但是，至今尚未有大黄鱼原肌球蛋白（Tropmyosin）序列的报道。

发明内容

本发明的目的在于提供大黄鱼原肌球蛋白（Tropmyosin）基因。

本发明的第二目的在于提供大黄鱼原肌球蛋白基因的克隆方法。

本发明的第三目的在于提供大黄鱼原肌球蛋白的GST重组蛋白。

本发明的第四目的在于提供大黄鱼原肌球蛋白的GST重组蛋白的制备方法。

本发明的第五目的在于提供大黄鱼原肌球蛋白基因的应用。

所述大黄鱼原肌球蛋白（Tropmyosin）基因，具有序列表中SEQ ID NO.1基因序列。

所述大黄鱼原肌球蛋白（Tropmyosin）基因的克隆方法，包括如下步骤：

1)从大黄鱼的肌肉组织中提取总RNA；

2)进行cDNA第一链合成；

3)根据其它鱼类Tropmyosin的保守序列设计引物进行PCR反应，得到原肌球蛋白（Tropmyosin）基因片段，其中：

正向引物F1：5’CCAGTTGGTKGAGGAGG3’；

反向引物R1：5’GWGTAGTCATRTCGTTG3’；

4)用2条基因特异性正向引物：

F2：5’CGCGCTCAGGAGAGACTG3’；

F3：5’GAAGGTGATCGAGAACAG3’；

进行原肌球蛋白（Tropmyosin）基因cDNA3’端快速扩增（3’RACE）；

5)用2条基因特异性反向引物：