[发明专利]梭曼抗原、梭曼疫苗及其用途

说明书

本发明涉及梭曼抗原及梭曼疫苗，具体涉及由梭曼半抗原和载体蛋白偶联得到的免疫抗原，以及利用该免疫抗原制备的梭曼疫苗组合物。本发明还涉及所述免疫抗原和疫苗组合物用于制备预防或治疗梭曼中毒的药物和/或疫苗中的用途，以及乙肝表面抗原作为载体蛋白的用途。本发明的疫苗组合物能显著提高免疫动物的特异性体液免疫和细胞免疫，有效预防梭曼中毒。

技术领域

本发明涉及梭曼抗原及梭曼疫苗，具体涉及由梭曼半抗原和载体蛋白偶联得到的免疫抗原，以及利用该免疫抗原制备的梭曼疫苗组合物。本发明还涉及所述免疫抗原和疫苗组合物的用途，以及乙肝表面抗原作为载体蛋白的用途。

背景技术

梭曼(甲氟磷酸频哪基醇酯，式Ⅲ所示)为一种剧毒的、难防难治的神经性毒剂。其毒理学特点复杂：（1）梭曼在体内外形成的膦酰化乙酰胆碱酯酶老化极快；（2）梭曼抑制的乙酰胆碱酯酶难以重活化；（3）梭曼的中枢作用强；（4）梭曼有AChE-Ach系统外的直接生化毒性作用。

目前研究用于梭曼中毒预防和治疗的药物主要以下几类药物：（1）N样和M样胆碱能受体拮抗剂：如美加明（mecxmylamine）和阿托品；（2）胆碱酯酶重活化剂：如双吡啶单肟HI-6、对称双吡啶季铵盐和氟化钠；（3）抗氧化剂：如葡萄糖酸锌[Zn(C₆H₁₁O₇)₂]、维生素A和E；（4）有机磷水解酶：如中华大蟾蜍血清；（5）触酶：如过氧化氢酶等；（6）抗惊厥药：如安定（叶和钰，中国药学杂志，1990,25（8）：451-453）。

从20世纪90年代，我国率先开始采用化学免疫的方法研究梭曼中毒的预防和治疗。设计和合成梭曼类似物（四配位的α-羟基膦酸频哪酯，P4），并与牛血清白蛋白和血蓝蛋白偶联，制备人工抗原（徐勤惠，等.细胞与分子免疫学杂志，2003,19（2）：172-174）。这种抗原免疫小鼠，能产生显著地抗体活性，且半抗原、梭曼和对氧磷能竞争性地抑制血清抗体（赵毅民，等.军事医学科学院院刊，1995,19（3）：203）。Pei J等以膦酸梭曼水解过渡态类似物（五配位-羟基膦酸酯,3-羟基-1-对硝基苯基甲膦酸单频哪基醇酯，P6）为半抗原，与血蓝蛋白偶联后免疫小鼠，能较好地对抗1.5倍梭曼中毒（Pei J,et al.Toxicol Lett.2009,187(1):45-51）。Li B等将梭曼分子与人血清白蛋白477或转铁蛋白257-293的酪氨酸偶联，免疫兔获得血清抗体，能识别梭曼分子（Li B,Chem Res Toxicol.2013Mar21.Epub aheadof print）。

由于半抗原P6为小分子物质，需要与大分子载体蛋白共价偶联形成“半抗原-载体蛋白”偶联物（也称完全抗原）才具有一定免疫原性。

匙孔型血蓝蛋白(KLH)是一种含铜蛋白,属于非亚铁血红素蛋白,称为血蓝蛋白。由于这种蛋白具有很强的免疫原性，但同时也具有较强的毒性，因此常常只作为载体蛋白用于动物实验研究所用。因此本领域亟需找到适合人用梭曼疫苗的载体蛋白。

发明内容

本发明的目的是选择合适的载体蛋白，再将免疫原性弱的半抗原P6与选择的载体蛋白偶联，制备梭曼疫苗的新抗原，然后再与佐剂合用，用于梭曼中毒的预防和治疗。

本发明的发明人经过不懈地努力和大量实验，发现以O¹-甲基-O²-(1,2,2-三甲基丙基)-(5-氨基-2-羟基苯基)甲基膦酸(P6)为梭曼半抗原，与载体蛋白偶联制备免疫抗原，能显著提高免疫动物的特异性体液免疫和细胞免疫，有效预防梭曼中毒，由此完成了本发明。

本发明第一方面涉及一种偶联物，其由式Ⅰ所示的化合物与载体蛋白偶联形成，

其中所述载体蛋白选自乙肝表面抗原、乙肝核心抗原、破伤风毒素、白喉类毒素、霍乱毒素。