[发明专利]人ROR2基因突变及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及人ROR2的基因突变和分析人ROR2基因的突变的方法，以及此突变在短指症B型辅助诊断的用途。

背景技术

短指症（Brachydactyly），又名短趾症，是一种常染色体显性遗传疾病。是指（趾）骨、掌（跖）骨发育异常导致的指（趾）骨缩短、缺如或融合的手足先天畸形。1951年，Bell根据畸形发生部位和患者受累程度的不同，将遗传性短指畸形分为A、B、C、D、E五种类型，并将A型进一步细分为A1、A2、A3三种亚型。其中短指症B型（Brachydactyly type B,BDB）是众分型中表型最严重的一种，表型独特。BDB患者2-5指远节指骨及指甲发育不良甚至缺失，中间指骨发育不良，伴有指甲的部分或完全缺失；拇指可表现正常也可呈现扁宽或末节指骨分叉畸形；足部表型与手部相似，但受累程度较轻。

受体酪氨酸激酶样孤独受体2（Tyrosine-protein kinase transmembrane receptor2,ROR2)基因为BDB1的主要致病基因[Oldridge,M.,Fortuna,A.M.,Maringa,M.,Propping,P.,Mansour,S.,Pollitt,C.,DeChiara,T.M.,Kimble,R.B.,Valenzuela,D.M.,Yancopoulos,G.D.,Wilkie,A.O.M.Dominant mutations in ROR2,encoding an orphan receptor tyrosine kinase,cause brachydactyly type B.Nature Genet.24:275-278,2000.]，由Oldridge等于1999年定位于9q22。该基因全长约235kb，共9个外显子，编码长度为943个氨基酸。它参与了早起的软骨细胞形成发育，与软骨及骨骼生长相关[DeChiara,T.M.,Kimble,R.B.,Poueymirou,W.T.,Rojas,J.,Masiakowski,P.,Valenzuela,D.M.,Yancopoulos,G.D.Ror2,encoding a receptor-like tyrosine kinase,is required for cartilage and growth plate development.Nature Genet.2000.24:271-274]。ROR2基因与其配体Wnt5a结合抑制典型的Wnt信号途径，影响胚胎发育、细胞增殖和分化调控[Mikels,A.J.,Nusse,R.Purified Wnt5a protein activates or inhibits beta-catenin-TCF signaling depending on receptor context.PLoS Biol.4:e115,2006.Note:Electronic Article.]。

导致BDB的基因突变非常稀有，到目前为止，国际上共发现约10种致病突变，国内仅发现2种，均位于ROR2基因的第8、9外显子内，以无义突变或移码突变的形式导致截短蛋白或异常C-末端的产生。

本发明以BDB家系为研究对象，结合基因测序技术及单链构象多态性技术，鉴定了ROR2的一个新的致病突变。目前国际上还没有关于ROR2基因S758X突变导致短指症B型疾病的报道。

发明内容

本发明的第一个目的在于提供一种检测人ROR2基因突变的方法；

本发明的第二个目的在于提供用于检测人ROR2基因突变的试剂盒。

本发明研究发现ROR2基因9号外显子第887位核苷酸C→A无义突变与BDB相关联。该突变致所编码的第758位氨基酸就由丝氨酸（TCG）变成终止密码子（TAG），这一突变致使ROR2蛋白被截短185个氨基酸，从而使其理化性质和功能发生改变。经研究发现，与人类BDB疾病密切相关。

为此，本发明第一方面，提供一种检测人ROR2基因的突变的方法，其包括以下步骤：

(a)确定在样品中人ROR2基因编码的第758位氨基酸，或SEQ ID NO:1的第2471至2473位核苷酸；

(b)检测在所述位置是否存在氨基酸S→X突变。