[发明专利]一种筛选黄嘌呤氧化酶抑制剂的复合物及其应用方法

说明书

技术领域

本发明属于中药成分筛选领域，涉及一种筛选黄嘌呤氧化酶抑制剂的复合物及其应用方法。

背景技术

痛风是由于嘌呤代谢紊乱导致血尿酸水平增高，或尿酸排泄减少而导致尿酸盐在组织沉积的疾病，为临床难治性疾病之一。其临床特点是高尿酸血症，尿酸盐沉积所导致反复发作的急、慢性关节炎和软组织损伤，尿酸性肾结石所致的痛风性肾病。痛风是一种非常古老的疾病，七千多年前出土的埃及木乃尹上就已发现尿酸盐性肾结石。并且随着现代经济发展，人们生活水平的提高以及生活方式的改变，蛋白类食品成倍增加，痛风及高尿酸血症的患病率在全球范围内呈上升趋势。我国痛风发病形势尤其严峻，以增长速度快、患者绝对数量庞大为特点，己有趋势成为拥有世界上最多痛风病患者的国家。

高尿酸血症是痛风的生化标志。尿酸的产生与排出之间的平衡关系决定了尿酸在细胞外液的浓度。尿酸生成量超过其排泄，就会产生尿酸累积，进而出现血尿酸增高。在人体内尿酸的生成过程中黄嘌呤氧化酶起着非常重要的作用。通过抑制黄嘌呤氧化酶的活性，可降低体内的尿酸生成量，从而缓解高尿酸血症而减少痛风的发生。并且，黄嘌呤氧化酶在催化反应过程中，还会产生大量的自由基，对人体造成更广泛的损害。为了减少人体内尿酸及自由基的形成，可通过抑制剂对黄嘌呤氧化酶的活力进行抑制来实现。目前在临床上使用的黄嘌呤氧化酶抑制剂只有别嘌醇，但是别嘌醇具有很多的毒副作用。因此发现和寻找新的黄嘌呤氧化酶抑制剂具有十分重要的意义。

传统的从中草药或天然药物中筛选活性成分，往往首先通过柱层析、萃取、制备色谱等各种分离手段对复杂体系的化学成分进行系统分离与结构鉴定，再对得到的单体成分进行活性测试，最终寻找到活性成分。但这种方法在操作过程中存在操作繁琐、工作量大、周期长、目标不明确、活性成分在分离过程中易丢失等不足，且大量的时间与精力花费在已知物质的分离鉴定上。随着对中草药的研究越发深入，对微量活性成分分析需求的增加，如何从中草药等复杂体系中快速、高效地筛选出活性成分，成为现代药物研究的重要课题之一。

四氧化三铁磁性纳米粒子不仅具有磁性材料的磁分离效应，还具备纳米材料的量子尺寸效应、小尺寸效应和表面效应等性质，广泛应用于冶金、磁学和生物学等领域。磁性纳米粒子具有超顺磁性，易在外加磁场作用下从反应体系中分离和回收，被广泛用作制备固定化酶的载体材料。相比于游离酶在分离和重复使用上的不足，磁性材料固定化酶具有快速与反应物分离、较长时间内重复使用、提高酶的稳定性、提高酶的使用效率、降低成本等优点。本发明利用四氧化三铁磁性纳米粒子的特点，将其用黄嘌呤氧化酶修饰，制备筛选黄嘌呤氧化酶抑制剂的复合物，取得了很好的效果。

发明内容：

本发明的目的是基于现有中草药中黄嘌呤氧化酶抑制剂的筛选步骤较为繁琐，时间较长且耗费有机溶剂的问题，提供一种用于筛选黄嘌呤氧化酶抑制剂的复合物及其应用方法。本发明以黄嘌呤氧化酶修饰的磁性纳米四氧化三铁粒子为筛选载体，利用受体-配体亲和反应原理，从中草药样品中筛选到与受体黄嘌呤氧化酶结合的配体，再经过脱附、高效液相色谱-质谱联用技术检测，能够实现快速筛选鉴定中草药中的黄嘌呤氧化酶抑制剂。该复合物制备过程简单、安全无毒、成本低廉，可重复使用。用于筛选黄嘌呤氧化酶抑制剂的方法过程简单、安全可靠、能高效快速的筛选出黄嘌呤氧化酶抑制剂，并能够为寻找新型抗痛风药物奠定基础。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

一种筛选黄嘌呤氧化酶抑制剂的复合物，是通过戊二醛作为交联剂，将黄嘌呤氧化酶固定在氨基化的四氧化三铁纳米粒子表面，得到的黄嘌呤氧化酶修饰的磁性纳米四氧化三铁粒子。

所述的氨基化是将四氧化三铁纳米粒子分散在乙醇溶液中，通过3-氨丙基三乙氧基硅烷进行表面氨基化处理。

上述复合物具体是将粒径在30～220nm的四氧化三铁纳米粒子分散在乙醇溶液中形成浓度为0.1-2mg/mL的四氧化三铁纳米粒子分散液，取50-200mL分散液，并向溶液中逐滴滴加0.4-8mL3-氨丙基三乙氧基硅烷；室温下搅拌4-8小时后过滤用乙醇溶液洗涤三次，置于50℃真空干燥箱中干燥；1-10mg氨基化的四氧化三铁纳米粒子分散在1-10mL的5wt%的戊二醛溶液中并搅拌0.5-2小时，反应后通过磁分离去除上清溶液，将1-4mL浓度为180μg/mL的黄嘌呤氧化酶的pH值为7的10mM的磷酸盐缓冲液溶液，加入到磁性纳米粒子中振荡反应0.5-4小时；得到的黄嘌呤氧化酶修饰的磁性纳米四氧化三铁粒子用磷酸盐缓冲液洗涤后待用。

所述的筛选黄嘌呤氧化酶抑制剂的复合物的应用方法，