[发明专利]一种筛选黄嘌呤氧化酶抑制剂的复合物及其应用方法

权利要求书

1.一种筛选黄嘌呤氧化酶抑制剂的复合物，其特征在于，是通过戊二醛作为交联剂，将黄嘌呤氧化酶固定在氨基化的四氧化三铁纳米粒子表面，得到的黄嘌呤氧化酶修饰的磁性纳米四氧化三铁粒子。

2.根据权利要求1所述的筛选黄嘌呤氧化酶抑制剂的复合物，其特征在于，

将四氧化三铁纳米粒子分散在乙醇溶液中，通过3-氨丙基三乙氧基硅烷进行表面氨基化处理。

3.根据权利要求2所述的筛选黄嘌呤氧化酶抑制剂的复合物，其特征在于，

将粒径在30～220nm的四氧化三铁纳米粒子分散在乙醇溶液中形成浓度为0.1-2mg/mL的四氧化三铁纳米粒子分散液，取50-200mL分散液，并向溶液中逐滴滴加0.4-8mL3-氨丙基三乙氧基硅烷；室温下搅拌4-8小时后过滤用乙醇溶液洗涤三次，置于50℃真空干燥箱中干燥；1-10mg氨基化的四氧化三铁纳米粒子分散在1-10mL的5wt%的戊二醛溶液中并搅拌0.5-2小时，反应后通过磁分离去除上清溶液，将1-4mL浓度为180μg/mL的黄嘌呤氧化酶的pH值为7的10mM的磷酸盐缓冲液溶液，加入到磁性纳米粒子中振荡反应0.5-4小时；得到的黄嘌呤氧化酶修饰的磁性纳米四氧化三铁粒子用磷酸盐缓冲液洗涤后待用。

4.权利要求1-3任一项所述的筛选黄嘌呤氧化酶抑制剂的复合物的应用方法，其特征在于，

将黄嘌呤氧化酶修饰的磁性纳米四氧化三铁粒子与中草药提取液孵育，再通过外界磁场进行磁分离得到活性成分与黄嘌呤氧化酶修饰的磁性纳米四氧化三铁粒子复合物，将复合物采用甲醇-水的混合溶液脱附，收集脱附液，运用液相色谱-质谱联用技术对得到的活性成分进行分离和鉴定，得到黄嘌呤氧化酶抑制剂。

5.根据权利要求4所述的应用方法，其特征在于，所述孵育是将10-40mg黄嘌呤氧化酶修饰的磁性纳米四氧化三铁粒子复合物加入到1-4mL中草药提取液中，在25℃下振荡0.5-3小时，之后磁分离收集磁性纳米粒子，并用磷酸盐缓冲液洗涤后，加入1-4mL80%的甲醇溶液并振荡1-10min脱附已结合的活性成分。

6.根据权利要求5所述的应用方法，其特征在于，

中药提取液的制备：将原料按照固液质量比为1：10的比例，用95%的乙醇溶液在85℃回流提取3小时，减压蒸馏至95%的乙醇溶剂全部蒸除得到浸膏；将上述浸膏按照固液质量比为1：100的比例用二次蒸馏水溶解，分别用等体积的石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取；分别通过减压蒸馏蒸除其中的有机溶剂，得到干膏状石油醚、乙酸乙酯、正丁醇部位样品；将各部位样品按照固液质量比为1：100用100%甲醇溶液溶解，分别过0.45μm滤膜备用。

7.根据权利要求6所述的应用方法，其特征在于，中药提取液选自葛花提取物或甘草提取物。

8.根据权利要求7所述的应用方法，其特征在于，

在从中草药样品葛花提取液中筛选黄嘌呤氧化酶抑制剂时，高效液相色谱的检测条件为：

色谱柱：Waters SunFire^TM C₁₈色谱柱规格为250mm×4.6mm i.d.,5μm；流动相：A相：含0.4%醋酸的水，B相：含0.4%醋酸的乙腈；梯度洗脱程序：t=0～12min，25%B相+75%A相；t＝12～15min，25～30%B相+75～70%A相；t＝15～30min，30～38%B相+70～62%A相；t＝30～33min，38～75%B相+62～25%A相；流速：0.8mL/min；柱温：25℃；进样量：20μL；

在从中草药样品甘草提取液中筛选黄嘌呤氧化酶抑制剂时，高效液相色谱的检测条件为：

色谱柱：Waters SunFire^TM C₁₈色谱柱规格为250mm×4.6mm i.d.,5μm；流动相：A相：含0.4%醋酸的水，B相：含0.4%醋酸的乙腈；梯度洗脱程序：t=0～10min，25%B相+75%A相；t＝10～20min，25～30%B相+75～70%A相；t＝20～35min，30～50%B相+70～50%A相；t＝35～45min，50%B相+50%A相；t＝45～60min，50～80%B相+50～20%A相；流速：0.8mL/min；柱温：25℃；进样量：20μL。

9.权利要求1-3任一项所述的筛选黄嘌呤氧化酶抑制剂的复合物的应用方法，其特征在于，用于制备筛选黄嘌呤氧化酶抑制剂的制剂。