[发明专利]貉源性成分检测用引物和探针及其检测方法

权利要求书

1.一种貉源性成分检测用引物和探针，其特征在于：

上游引物序列为：5’-TACAGCTGATCTCCTCACGTTAACA-3’；

下游引物序列为：5’-TTGGCCGATGATGATGAAAG-3’；

探针序列为：5’- AATTGCAGGCCAACCGGTCGAAC-3’，其5’端标记FAM 报告荧光基团，3’端标记TAMRA 淬灭荧光基团。

2.一种应用权利要求1所述的貉源性成分检测用引物和探针进行貉源性成分检测的方法，其特征在于包括如下步骤：

（1）提取样品DNA：取吸脂烘干并研磨成细粉的样品100mg放入2mL离心管中，加入CTAB提取液600μL和20mg/mL的蛋白酶K 10μL，65℃水浴加热1小时，分别加入Tris饱和酚、氯仿异戊醇各400μL分别摇匀，离心取上清加入1.5mL离心管中，加入该上清量2倍体积的CTAB沉淀液，室温静置1小时，离心弃上清，先加入氯化钠水溶液400μL摇匀溶解沉淀，再加入400μL氯仿摇匀，离心取上清，加入新的1.5mL离心管中，加入该离心管中上清量0.8倍体积的异丙醇摇匀静置1小时，离心弃上清，加入1000μL的70％酒精洗涤，离心，静置晾干，溶于100μL水中；

（2）进行实时荧光PCR 检测：实时荧光PCR 检测的反应体系为25μL：包括12.5μL 含有dNTP、Mg²⁺ 以及Taq 酶的2×real time PCR Buffer；所述的上游引物和下游引物各1μL，终浓度各为0.2μM；所述的探针1μL，终浓度为0.2μM；步骤（1）提取的样品DNA 模板2μL；纯水7.5μL；实时荧光PCR 检测的反应程序为：预变性：温度95℃，时间10分钟，然后进行PCR扩增：温度95℃，时间15秒，温度60℃时间1分钟，循环45 次。