[发明专利]一类双特异重组抗HBsAg抗体、其制备方法及用途

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，更具体地，本发明公开了一类双特异重组抗HBsAg抗体、其制备方法及其在预防、治疗乙型肝炎病毒感染中的应用。 

背景技术

乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus，HBV）是双链DNA病毒，引起慢性乙型肝炎，而导致肝衰竭、肝硬化和肝癌的发生。全球大约有三亿五千万HBV感染者，而这也成为世界公共健康问题。最近几十年，乙肝疫苗的研制成功，给乙肝的预防带来了很大的希望。然而，确有少部分人接种乙肝疫苗却不能激发免疫系统产生抗乙肝抗体，这一部分人群一旦接触到乙肝的高危因素，只能注射人乙肝免疫球蛋白来预防。但人免疫球蛋白成分相对复杂，使用的危险因素相对不确定。因此迫切需要开发一种人来源的、危险因素相对可控的生物制品替代人乙肝免疫球蛋白。 

随着生物技术的发展，基因工程抗体的发展日新月异。人源单克隆抗体产生包括EBV永生化B淋巴细胞，人B淋巴细胞杂交瘤技术，其它种属抗体的人源化，基于噬菌体库展示的全人抗体技术，基于人源化小鼠的全人抗体技术和Single cell RT-PCR单细胞抗体技术。由于EBV永生化B淋巴细胞转化率低，严重限制了这一技术的推广[Guan Y, Sajadi MM, Kamin-Lewis R, et al. Discordant memory B cell and circulating anti-Env antibody responses in HIV-1 infection. Proc Natl Acad Sci U S A 2009;106:3952-7]。人B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合效率极低，导致人B淋巴细胞杂交瘤技术很少被用于制备人源单克隆抗体。噬菌体展示库全人抗体技术是基于人免疫球蛋白轻链和重链基因的随机配对，未经历体细胞突变和免疫系统的双性选择，导致其筛选得到的抗体普遍亲和力低下（KD＞10^-7），解离速率快（V＜60min），抗体Tm值低（＜65℃），热稳定性差，潜在的过敏和自身免疫风险[Mohapatra S, Juan HS. Designer monoclonal antibodies as drugs: the state of the art. Expert Rev Clin Immunol 2008;4:305-7]。由于最具潜质的人源抗体技术-人源化小鼠的专利仅掌握在少数国际制药巨头手中，且开发成本高昂，严重制约了这一技术的推广。 

Single cell RT-PCR单细胞抗体技术直接从人外周血中分离含目的抗体的B细胞，运用单细胞RT-PCR技术直接克隆抗体轻链和重链，经过体外重组来制备抗体。所制备的抗体来源天然，危险因素可控。由于单克隆抗体都是从人外周血的B淋巴细胞中克隆而来，经历了人体免疫系统的双性选择、长期的体液循环和体细胞突变，因此，显示出其极好的亲和力（KD＜10^-9），解离速率慢（V＞6hours），热稳定性好，潜在的过敏和自身免疫风险低[Smith K, Garman L, Wrammert J, et al. Rapid generation of fully human monoclonal antibodies specific to a vaccinating antigen. Nat Protoc 2009;4:372-84]。Single cell RT-PCR单细胞抗体技术开发成本低廉，尤其针对外来抗原更能显示其优越性。