[发明专利]一类双特异重组抗HBsAg抗体、其制备方法及用途

权利要求书

1.一类双特异性抗体，它含有两个不同的重链可变区、轻链可变区，可以分别结合HBsAg不同的功能表位。

2.权利要求1所述，一类双特异性抗体，其特征是重链可变区具有SEQ NO：2所示的氨基酸序列，轻链可变区具有SEQ NO：4 所示的氨基酸序列。

3.一种分离的核苷酸分子，编码权利要求2所述氨基酸序列，具有SEQ NO：1所示核苷酸序列及SEQ NO：3所示核苷酸序列。

4.一种载体，含有权利要求3所述的核苷酸分子，和所述核苷酸分子的序列操作性相连的表达调控序列，其中载体可以为pDR1，pcDNA3.1（+）， pcDNA3.1/ZEO（+），pDHFR之一。

5.权利要求4所述的载体为pcDNA3.1（+）。

6.一种宿主细胞，含有权利要求5所述载体，为真核细胞。

7.权利要求6所述宿主细胞，为哺乳动物细胞。

8.权利要求7所述宿主细胞，为Freestyle 293F细胞。

9.一种制备权利要求1所述的双特异性抗体的方法，该方法包括：

a）、采用超高流速流式分选系统分离接种乙肝疫苗的志愿者外周血中HBsAg特异的记忆性B细胞，并制备成单细胞样本；

b）、采用Single Cell RT-PCR技术克隆每个样本中抗体相关基因，体外重组表达相应抗体；

c）、经过功能表位测定、亲和力测定及中和HBV活性测定，筛选出亲和力强、活性高的结合不同功能表位的两个抗HBsAg的单克隆抗体C4G4和D2H2；

d）、利用生物工程技术将C4G4、D2H2 这两个单克隆抗体的重链、轻链可变区分别经过重链linker、轻链linker连接，制备成具有双功能的抗体；

e）、在表达条件下，培养权利要求6-8任一所述的宿主细胞，表达双特异性抗体C4D2-BsAb，分离纯化。

10.一种组合物，含有权利要求1所述的双特异性抗体，和药学上可接受的载体。

11.权利要求1所述的双特异性抗体在制备抗HBV感染中的应用。

12.权利要求9所述的组合物在制备抗HBV感染中的应用。

13.权利要求10、11任一所述的用途，还包括和其他的抗HBV感染中的药物联合使用。