[发明专利]一种致敏鸡红细胞的制备方法及IBV检测试剂盒

权利要求书

1.一种致敏鸡红细胞的制备方法，包括如下步骤：

1)细胞固化：将新鲜鸡红细胞用缓冲液洗涤干净，加入醛溶液稀释，振荡反应，洗涤得到固化鸡红细胞；

2)细胞鞣化：将固化鸡红细胞稀释，加入鞣酸，得到鞣化鸡红细胞；

3)细胞致敏：将鞣化鸡红细胞稀释，加入IBV液混合作用，得到致敏鸡红细胞。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：细胞固化的操作为：

1)将新鸡红细胞用pH7.0 PBS液洗涤干净，通过离心沉淀将红细胞分离；

2)将红细胞用PBS液悬浮，加入戊二醛进行固化处理，振荡处理10 min以上至固化完全且红细胞未发生自凝；

3)用pH7.0 PBS液将戊二醛固化处理后的红细胞洗涤干净，得到固化鸡红细胞。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：红细胞悬液中，红细胞的浓度为8.48×10⁸～8.72×10⁸个/ml，戊二醛的质量浓度为0.3～1.25‰。

4.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于：细胞鞣化的操作为：将固化鸡红细胞用稀释液稀释制成悬液，在悬液中加入鞣酸，鞣化处理20～90 min，之后用PBS液洗净。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于：稀释后的固化鸡红细胞悬液中，红细胞的浓度为8.52×10⁸～8.68×10⁸个/ml，鞣酸的质量浓度为0.125～0.5%。

6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于：稀释液为蒸馏水。

7.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于：细胞致敏的操作为：将鞣化鸡红细胞稀释至4.26×10⁸～4.34×10⁸个/ml，与IBV病毒混合，35～40℃作用15～45 min，之后洗涤干净，得到致敏鸡红细胞。

8.一种IBV间接血凝试剂盒，含有致敏红细胞、阳性对照血清、阴性对照血清和致敏红细胞稀释剂，其特征在于：致敏红细胞按权利要求1～7任意一项所述方法制备得到。

9.根据权利要求8所述的IBV间接血凝试剂盒，其特征在于：稀释液为含有体积比为1%新生牛血清的pH7.0 PBS液。