[发明专利]一种高产型乌肤鸡品系的培育方法

说明书

技术领域

本发明具体涉及一种高产型乌肤鸡品系的培育方法，属于分子育种技术领域。

背景技术

乌骨鸡是闻名中外的药用家禽，1874年被国际上承认为标准品种，乌鸡肉和乌鸡蛋具有特殊的药用、营养及观赏价值。但乌鸡的产蛋性能低下。而国外的高产蛋鸡的产蛋性能非常好。为了提高其生产性能，育种工作者在育种实践中往往要导入高产蛋鸡的血缘，这就会使得乌肤性状发生分离，进而影响淘汰母鸡的价格。为了能够在提供生产性能的同时又保持淘汰母鸡的乌肤性状，乌肤位点基因型的判定就显得非常重要。传统育种中常常采用测交的方法，依据杂交后代鸡的表型性状留种。即通过测交、繁殖扩群来淘汰乌肤鸡群体里的乌肤杂合子个体。但是测交过程较为繁琐，周期长，且会受到扩群的大小的影响。

发明内容

本发明的目的是提供一种高产型乌肤鸡品系的培育方法。

为了实现以上目的，本发明所采用的技术方案是：

一种高产型乌肤鸡品系的培育方法，包括以下步骤：

（1）利用乌肤鸡品种作为父本与高产蛋鸡品种作为母本进行杂交，生产出F1代鸡；

（2）F1代自交得到F2代，选留F2代乌肤鸡；

（3）利用荧光定量PCR测定F2代乌肤鸡EDN3基因的相对拷贝数，确定F2代乌肤鸡个体的基因型，选留乌肤位点为FmFm基因型的个体，淘汰乌肤位点为Fmfm基因型的个体，得到乌肤位点为FmFm基因型的公母鸡；

（4）对得到的FmFm基因型个体进行横交和扩繁，按照家系选择和个体选择方法，提高产蛋量，同时提纯和固定乌肤性状，经过4个世代以上的选育后，得到乌肤位点为FmFm基因型的高产型乌肤鸡品系。

所述步骤（1）中的乌肤鸡品种为丝羽乌骨鸡、江山乌骨鸡、金湖乌凤鸡、余干乌骨鸡、郧阳乌骨鸡、雪峰乌骨鸡、四川山地乌骨鸡、乌蒙乌骨鸡、腾冲雪鸡、略阳鸡（黑河乌鸡）、他留乌骨鸡、无量山乌骨鸡、盐津乌骨鸡等。

所述步骤（1）中的高产蛋鸡品种为白来航、罗曼、海兰、海赛克斯、尼克、巴布考克、黑康、特佳、雪佛、伊莎、京红、京粉、河北大午、农大3号、新杨褐、新杨白等。

所述步骤（3）中利用荧光定量PCR测定F2代乌肤鸡EDN3基因的相对拷贝数，确定F2代乌肤鸡个体基因型的方法，包括以下步骤：以包含EDN3基因的待测鸡全血基因组DNA为模板，以引物对P为引物进行荧光定量PCR扩增，扩增片段的DNA序列如SEQ IDNo.3所示；

所述的引物对P为：

上游引物P-F：5’-CTTGACTTTTGGGATTTACCT-3’（如SEQ ID No.1所示），

下游引物P-R：5’-ACTGGTGCAGTATTTTCTGTT-3’（如SEQ ID No.2所示）。

该扩增序列的全长为134bp，位于鸡乌肤位点EDN3基因上，能够检测鸡乌肤基因位点EDN3基因是否存在拷贝数变异。

所述的荧光定量PCR扩增反应体系为：荧光定量PCR2×缓冲液10μL，ddH₂O7μL，P-F0.5μL，P-R0.5μL，DNA模板2μL。

所述的荧光定量PCR2×缓冲液主要包括5U/μL Taq DNA Polymerase，10×Buffer，25mM MgCl₂，2mM dNTPs，SYBR Green I。

所述的荧光定量PCR扩增反应程序为：95℃预变性2min；40个循环：95℃变性30s，57℃退火30s，72℃延伸30s；72℃延伸10min；20℃保存。

具体的，所述步骤（3）中利用荧光定量PCR测定F2代乌肤鸡EDN3基因的相对拷贝数，确定F2代乌肤鸡个体基因型的方法，还包括以下步骤：利用标准曲线求得待测鸡EDN3基因的相对拷贝数，根据其相对拷贝数鉴定鸡乌肤位点的基因型。

所述的标准曲线的制作方法为：以白肤鸡全血基因组DNA作为荧光定量标准品，浓度分别为80，40，20，10，5，2.5ng/μL，以引物对P为引物进行荧光定量PCR扩增，以上述六个标准品的Ct值为纵坐标，以浓度的对数值为横坐标，建立标准曲线，求得标准曲线方程。

所述的利用标准曲线求得待测鸡EDN3基因的相对拷贝数的方法为：荧光定量PCR扩增前，先将待测鸡的DNA稀释到同一浓度10ng/μL，再将待测鸡的Ct值代入标准曲线方程中，求出其对应的对数浓度，再转化为浓度，即为该待测鸡EDN3基因的相对拷贝数。