[发明专利]IL-17F基因实时荧光PCR检测引物及试剂盒

说明书

 

技术领域

本发明属于基因表达领域，尤其是涉及IL-17F基因PCR检测引物。

背景技术

白介素17（IL-17）是一种炎症前因子，其家族成员在自身免疫性疾病、移植排斥反应及炎症中起着重要作用，IL-17普遍存在与Th17细胞、CD8记忆T细胞、嗜酸性粒细胞、中性粒细胞和单核细胞中，主要来源于Th17细胞家族。IL-17家族成员主要包括IL-17A、IL-17B、IL-17C、IL-17C、IL-17D和IL-17E、IL-17F。目前，研究发现IL-17F在哮喘中扮演重要角色，作为哮喘的促炎因子。IL-17F经常在哮喘病人的气管中出现，并且其严重程度与IL-17F浓度相关；IL-17F可以诱导多种细胞因子，包括趋化因子、粘结因子等；在小鼠IL-17F过量表达时与出现气管的中性粒细胞增多、和诱导多种相关促炎因子表达增加；IL-17F成为哮喘治疗和诊断的主要分子标记。

目前IL-17F的检测中，目前没有有效的引物进行检测，并利用传统的抗体检测方法，但是此方法费用较高，花费时间长，并且并利用大范围的使用。RT-PCR 是研究检测特定基因表达的一个简便、准确的方法。通过RT-PCR 在mRNA

水平上检测某个基因的表达情况，可以提高检测的准确率。

发明内容

为了解决上述现有技术的不足，本发明目的在于提供用于检测IL-17F基因表达的引物。

本发明所采用的技术方案如下：

IL-17F基因实时荧光PCR检测引物，所用的正反引物如下：

正向引物（SEQ ID NO.1）:5-CTGGGACGTACCGGGTCGGT-3

反向引物（SEQ IN NO.2）:5-GTCTGTCGCCTGAACAACGTCT-3。

IL-17F基因实时荧光PCR检测试剂盒，其包括一种混合试剂，所述的混合试剂包括：SYBR Premix Ex Taq II（2×）、、正向引物10μM、反向引物10μM。

所述的正向引物和反向引物为上述的引物。

IL-17F基因实时荧光PCR检测方法，具体步骤为：

 1）提取RNA，并反转录为cDNA；

     2）反应体系：取2μl 步骤1）制得的模板cDNA 溶液，加入上述试剂盒中的溶液12μl，再加入灭菌超纯水至总体积20μl ；将以上各组分加入至0.2mL 实时荧光PCR 反应管中，短暂离心；

3）实时荧光PCR 检测，具体反应提交如下：

95℃ /10s，1 次循环；95℃ /50s，66℃ /60s，40 次循环。

本发明采用SYBR Green I 实时荧光PCR 检测方法，对IL-17A基因进行鉴定，具有检测实时性和高效性，并可以对早期IL-17A基因表达进行检测，用于早期判断自身免疫性疾病，另外可以对病人进行个性诊断和治疗过程中，IL-17A的基因表达情况的检测，并判断病人复发和加重病情的可能性。

附图说明

附图1为检测样品1-6实时荧光PCR检测曲线；

附图2为检测样品1-6和阴性对照对比图表。

具体实施方式

结合实施例对发明申请做进一步的说明。

设计IL-17F基因实时荧光PCR检测引物，所用的正反引物如下：

正向引物（SEQ ID NO.1）:5-CTGGGACGTACCGGGTCGGT-3

反向引物（SEQ IN NO.2）:5-GTCTGTCGCCTGAACAACGTCT-3。

IL-17F基因实时荧光PCR检测试剂盒，其包括一种混合试剂，所述的混合试剂包括：SYBR Premix Ex Taq II（2×）、、正向引物10μM、反向引物10μM。

实施例1

1）提取6位哮喘病人血清样品，标记为1-6，2位正常人血清作为阴性对照；分别提取各样品的RNA，并反转录为cDNA，低温保存备用。

2）取步骤1）中所述的取2μl 步骤1）制得的模板cDNA 溶液，加入上述试剂盒中的溶液12μl，再加入灭菌超纯水至总体积20μl ；将以上各组分加入至0.2mL 实时荧光PCR 反应管中，短暂离心；

3）实时荧光PCR 检测，具体反应提交如下：

95℃ /10s，1 次循环；95℃ /50s，66℃ /60s，40 次循环。

结果分析：

对得到实时荧光PCR检测的曲线进行分析；并对检测样品和阴性对照的荧光进行分析。