[发明专利]鸡快慢羽基因型的鉴别方法及雏鸡雄雌鉴别方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种鸡快慢羽基因型的鉴别方法及一种采用上述基因型建系下的雏鸡雄雌鉴别（自别）方法，属于分子生物学技术领域和动物养殖技术领域。

背景技术

雌雄鉴别在现代养鸡生产中发挥着重要作用。当前用于雌雄鉴别的技术主要有翻肛鉴别和利用羽色、羽速等雌雄自别。由于翻肛鉴别需要对鉴别人员进行特殊培训，且在鉴别过程中会对鸡群造成伤害，因此，为了给蛋鸡饲养者提供更为优质的雏鸡，保证其经济效益，采用一种对鸡群无伤害的雌雄自别技术显得格外重要。

关于雌雄自别技术，目前主要通过羽色和羽速来实现，应用最多的是羽速鉴别。羽速鉴别相对于翻肛鉴别，其鉴别速度快，准确率高，并且鉴别人员也不需要进行特殊培训，最重要的是对雏鸡损伤小，疾病交叉感染机率低，因此，在现在种鸡饲养中被广泛使用。虽然利用羽速进行雏鸡雌雄鉴别的方法相比翻肛鉴别要容易得多，但是该方法也存在一定的局限：一是鉴别时间：在利用羽速进行雌雄鉴别时，一般需在雏鸡出壳后24小时内完成；二是成本投入：要实现羽速自别雌雄，需要构建相应的配套系，通过羽速表型构建配套系至少需要经过2-3个世代才能实现，并且建系时需从雏鸡开始；三是鉴别标准：对于雏鸡如何分辨快羽和慢羽，当前普遍认为雏鸡出生时，主翼羽长于覆主翼羽2mm以上的为快羽，主翼羽比覆主翼羽长2mm以下、等长或略短的为慢羽（邱祥聘，1997）。

关于快慢羽的证明，早期是通过检测内源病毒ev21(Endogenous Virus-21，ev21)的插入来进行判断的，研究发现ev21在白来航群体中，与慢羽基因K有十分紧密的联系（遗传距离<0.3cM）（Bacon et al, 1988），因此，慢羽个体中存在ev21的插入，而快羽个体中不存在。但是后来研究发现，在一些褐壳系鸡群中，少量快羽个体中也有ev21的插入，而且一些慢羽个体中不存在ev21的插入（Tixier-Boichard et al, 1994），因此表明ev21的插入，只是慢羽的紧密连锁的位点，并不是充要条件。Elferink等（2008）发现了快羽基因k位点与慢羽基因K位点的差异，并推测慢羽的形成，其实是由催乳素受体（PRLR）基因3’端的一部分和编码精子鞭毛蛋白2（SPEF2）基因5’端一部分以及两基因中间的非编码区组成的重复片段导致的。罗成龙（2012）随后利用SNP对来自同一群体的12个快羽和12个慢羽杏花鸡个体羽速性状进行了基因组关联分析，并证实了Elferink等人的猜想。然而，李竞一（2012）通过连锁不平衡对国内地方品种鸡快慢羽基因进行定位时发现，国内一些地方品种快羽个体中也有一些存在重复片段。同时，慢羽性状对快羽性状是显性，现有的利用重复片段鉴定鸡群快慢羽的方法只能检测表型，不能检测基因型，这就需要通过两到三个世代来纯化。另外，在某些褐壳品系中通过重复片段或者Mbo I酶切来鉴别时，不能有效进行扩增，从而导致鉴定失败。

发明内容

为克服现有技术的上述不足，本发明提供了一种鸡快慢羽基因型的鉴别方法，还提供了一种基于所鉴别基因型的雏鸡雄雌鉴别（自别）方法，本方法的基因型鉴别不受时间限制，适宜于包括褐壳品系在内的各种鸡系，可以有效地鉴别出各种纯合和杂合基因型，依据这种基因型鉴别结果，可以极大程度地缩短羽速自别雌雄配套系的建系时间。

本发明实现上述目的的技术方案为：

一种鸡快慢羽基因型的鉴别方法，对鸡血样中的DNA进行PCR扩增，获得长度为171bp的扩增产物（目的基因），以Taq I内切酶对扩增产物进行酶切，检测酶切后的基因片段长度并据此判断羽速基因型，

所述扩增引物为：

正向引物F：5'-GCACATTCAAGTAAGCAGTAGTTT-3'，

反向引物R：5'-AAAAAAAAAAAAAATTGCACTTTAATAGTACCATCTATTC-3'，

所述Taq I内切酶的识别序列为：T^↓CGA，

所述基因型的判断标准为：

扩增产物经酶切后存在长度分别为132bp和39bp的两种片段的，为慢羽纯合；

扩增产物经酶切后存在长度分别为171bp、132bp和39bp的三种片段的，为慢羽杂合；

扩增产物经酶切后只存在长度为171bp的片段的（实际上是不受酶切，但为表述上的便利，目标基因无论是否被酶切，经过酶切步骤后，均称为酶切后的片段），为快羽纯合。

通常，可以采用琼脂糖凝胶下的电泳检测方法进行所述扩增产物经酶切后片段长度的检测。