[发明专利]鸡快慢羽基因型的鉴别方法及雏鸡雄雌鉴别方法

权利要求书

1.一种鸡快慢羽基因型的鉴别方法，对鸡血样中的DNA进行PCR扩增，获得长度为171bp的扩增产物，以Taq I内切酶对扩增产物进行酶切，检测酶切后的基因片段长度并据此判断羽速基因型，

所述扩增引物为：

正向引物F：5'-GCACATTCAAGTAAGCAGTAGTTT-3'，

反向引物R：5'-AAAAAAAAAAAAAATTGCACTTTAATAGTACCATCTATTC-3'，

所述Taq I内切酶的识别序列为：T^↓CGA，

所述基因型的判断标准为：

扩增产物经酶切后存在长度分别为132bp和39bp的两种片段的，为慢羽纯合；

扩增产物经酶切后存在长度分别为171bp、132bp和39bp的三种片段的，为慢羽杂合；

扩增产物经酶切后只存在长度为171bp的片段的，为快羽纯合。

2.如权利要求1所述的鸡快慢羽基因型的鉴别方法，其特征在于采用琼脂糖凝胶下的电泳检测方法进行所述扩增产物经酶切后片段长度的检测。

3.如权利要求2所述的鸡快慢羽基因型的鉴别方法，其特征在于在所述电泳检测中，琼脂糖凝胶采用1.5%－2%的琼脂糖凝胶，电泳电压采用100V，电泳时间为35分钟。

4.如权利要求3所述的鸡快慢羽基因型的鉴别方法，其特征在于当所述电泳检测中39bp条带因长度太小而检测不到时，以其余条带作为判断依据：电泳结果仅有132bp一条条带时，为慢羽纯合；电泳结果有171bp和132bp两条条带时，为慢羽杂合；电泳结果仅有171bp一条条带时，为快羽纯合。

5.如权利要求1、2、3或4所述的鸡快慢羽基因型的鉴别方法，其特征在于所述PCR扩增的反应体系为：

2×PCR Mix                  7μL

ddH2O                       6μL

正向引物F，4μM             0.5μL

反向引物R，4μM             0.5μL

DNA模板，20-50ng/μL        1μL

相应的反应程序为：

① 95℃                     5min

② 95℃                     30sec

③ 55℃                     30sec

④ 72℃                     30sec

⑤ Goto ② for 40 cycles

⑥ 72℃                     7min

⑦ 4℃保存。

6.如权利要求5所述的鸡快慢羽基因型的鉴别方法，其特征在于所述DNA模板的制备方式为：

1）取鸡血50μL，加Buffer A 溶液500-550 μL，充分混匀；

2）65℃恒温水浴2-4 小时；

3）加Buffer B溶液 850 μL，充分混匀；

4）冰浴15-30分钟；

5）12000 rpm 常温离心15分钟；

6）吸上清600-800 μL（如有必要再次12000rpm 常温离心15分钟，吸上清）；

7）加氯仿600 μL, 充分混合2-3分钟；

8）12000 rpm 离心10 分钟；

9）吸取上清600 μL，加异丙醇600 μL，充分混合2-3分钟；

10）12000 rpm 常温离心10 分钟；

11）去上清，加70％的酒精1mL 洗涤沉淀；

12）12000 rpm 常温离心3-5 分钟；

13）去上清，真空离心抽风10 分钟；

14）加TE 200μL，4℃溶解，

所述Buffer A溶液：100 mM Tris-Cl (pH 7.5)，100 mM EDTA，100 mM NaCl，0.5% SDS，室温保存，

Buffer B溶液：取200 ml 5 M 乙酸钾溶液和500 ml 6 M 氯化锂溶液，充分混匀，4℃保存。