[发明专利]一种联二脲的液相色谱串联质谱检测方法

说明书

技术领域

本发明属于食品污染物的检测领域，是利用液相色谱串联质谱快速、准确地检测联二脲的方法。

背景技术

在现代工业中，联二脲(HDC)是生产发泡剂偶氮甲酰胺(ADA)的主要中间体。其主要工艺是原料水合肼溶液在酸性条件下发生缩合反应，生成中间体HDC，将HDC氧化制成ADA。在食品行业中，ADA作为一种新型面团改良剂可改善面团的物理操作性质及面制品组织结构，因而被广泛应用于面粉及其面制品中。研究发现，添加了ADA的面粉在揉制面团时，ADA可通过小麦蛋白还原而转化为HDC，HDC进一步降解又可转化为有毒物质盐酸氨基脲(SEM)。由于HDC既是ADA的转化产物又是ADA与SEM转化的中间产物，其含量的监控对于准确了解ADA在面制品加工过程的转化规律起着重要作用。但是目前国内外并没有能准确快速检测HDC的方法，既无国家标准，也无行业标准。

发明内容

本发明目的在于提供一种操作简便、分析迅速的HDC的液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)检测方法。本发明的技术方案如下：

(1)样品预处理

将样品用0.2mol/L盐酸溶液进行HDC的浸泡萃取，离心，取上清液并稀释后过LC-18固相萃取小柱，弃去流出液，用甲醇进行洗脱，将洗脱液氮吹至干，并用纯水定容，用0.22μm膜过滤，从而完成样品的前处理。

(2)LC-MS/MS条件

采用XBridge BEH Amide色谱柱(3.5μμm×4.6mm×150mm)；柱温：35℃；流动相：等度洗脱，V(乙腈)：V(水)=70：30；流速：0.6mL/min；时间：8min；

电喷雾，正离子模式；扫描方式：多反应监测；离子喷雾电压：5500V；离子源温度：600℃；雾化气：55。

(3)HDC液相色谱串联质谱检测标准曲线的绘制

准确称取HDC标准品0.05g(精确到0.0001g)置于50mL容量瓶中，先用少部分水溶解，再用水定容至50mL，配制成100mg/L的HDC储备液。称取6个阴性空白面粉0.5g(精确到0.0001g)于50mL离心管中，分别加入HDC标准溶液，配置最终分别含有0.5、1.0、5.0、10.0、15.0、20.0μg/kg HDC的面粉样品。再按照方案(1)中样品预处理后，按方案(2)的检测条件进行测定。以HDC浓度为横坐标(X)，峰面积为纵坐标(Y)，绘制标准曲线，用于分析样品中HDC的含量。

(4)样品的测定

取不同的实际样品，根据方案(1)中样品预处理后，按方案(2)中检测条件进行检测，并利用方案(3)中得到的标准曲线计算样品中HDC含量。

本发明的优点与有益效果是：采用本发明的LC-MS/MS法检测食品中HDC，方便快捷，灵敏度高，检测限低，有利于HDC的快速检测，可用于大规模样品检测，适于标准化。

附图说明

图1为HDC的标准曲线，横坐标为HDC浓度，纵坐标为HDC色谱峰峰面积。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明做进一步详细说明，但本发明并不仅仅局限于下述实施例。

实施例1

准确称取HDC标准品0.05g(精确到0.0001g)置于50mL容量瓶中，先用少部分水溶解，再用水定容至50mL，配制成100mg/L的HDC储备液，置于4℃冰箱中保存。称取6个阴性空白面粉0.5g(精确到0.0001g)于50mL离心管中，分别加入HDC标准溶液，配置最终浓度分别为0.5、1.0、5.0、10.0、15.0、20.0μg/kg的标准溶液。根据方案(1)中样品预处理后，按方案(2)中检测条件进行测定，以峰面积(Y)对浓度X(mg/L)进行线性回归，绘制标准曲线(图1)，通过不断降低标准溶液浓度，取信噪比为3时的浓度为最低检出限。得标准曲线函数关系为：Y=3594.2+19523X，相关系数为R²=0.9992，最低检出限为0.1μg/kg。

实施例2

准确称取3份空白面粉0.5g(精确至0.0001g)作为基质，分别添加HDC际准溶液，使得面粉中HDC含量分别为2.0、5.0、10.0μg/kg，按照方案(1)中样品前处理步骤进行处理，每个浓度水平下做3个平行试验，按照按方案(2)检测条件进行检测，测定该方法的回收率与精密度。分析结果见表1，加标回收率在89.00％～102.73％之间，相对标准偏差均小于5.0％，方法可靠。

表1样品回收率测定

以上较佳实施例仅用于说明本发明的内容，除此之外，本发明还有其他实施方式，但凡本领域技术人员因本发明所涉及之技术启示，而采用等同替换或等效变形方式形成的技术方案均落在本发明的保护范围内。