[发明专利]一种检测不同种类“瘦肉精”残留的样品前处理方法

说明书

技术领域：

本发明涉及一种生物检测方法，具体涉及一种检测不同种类“瘦肉精”残留的样品前处理方法。

背景技术：

“瘦肉精”，最初是盐酸克伦特罗的俗称，现泛指养殖业非法使用的具有促进动物生长、提高瘦肉率的含β-肾上腺能受体激动剂类的一类物质。包括我国在内的许多国家都对食品动物中β₂-受体激动剂的违法使用实施了严格的监管，自2002年以来，我国就先后发布了176号、193号、235号公告，2010年又发布了1519号公告，明确规定禁止使用盐酸克伦特罗、沙丁胺醇、硫酸沙丁胺醇、莱克多巴胺、盐酸多巴胺、西马特罗、硫酸特布他林、苯乙醇胺A、班布特罗、盐酸齐帕特罗、盐酸氯丙那林、马布特罗、西布特罗、溴布特罗、酒石酸阿福特罗、富马酸福莫特罗等β₂-受体激动剂及盐酸可乐定、盐酸赛庚啶等共计18种“瘦肉精”药物。

为了加强对“瘦肉精”药物的监管，国内外科研人员针对动物性食品中“瘦肉精”残留的检测方法开展了广泛的研究。目前，关注较多的主要有克伦特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺等3种药物，对其他药物的检测方法相对滞后；而对同时检测可乐定、赛庚啶、苯乙醇胺A、氯丙那林等新型“瘦肉精”药物残留的分析方法国内外尚未有报道。

从检测标准来看，我国虽已发布了多个检测动物组织中β₂-受体激动剂的检测标准，如：GB-T22286-2008《动物源性食品中多种β-受体激动剂残留量的测定液相色谱串联质谱法》、农业部1025号公告-18-2008《动物源性食品中β-受体激动剂残留检测液相色谱－串联质谱法》等标准，也仅针对10余种β₂-受体激动剂的检测，而且在样品前处理过程中，液液萃取程序复杂、操作繁琐，耗时耗力，对工作人员的操作技术要求较高，对检测结果的准确性和精确度有直接影响；此外，试验过程中还使用了大量的卤素制剂（高氯酸），如对废液处理不当极易对环境和生物造成较大的影响。

在现代兽药残留检测中，液相色谱串联质谱仪等大型仪器设备日趋先进，样品前处理作为关键步骤更为重要，直接影响分析结果的精密度和准确度，选择合适的前处理方法，缩短样品的前处理时间，因此，良好的样品前处理技术是保证检测质量、提高检测效率的一个重要途径和关键环节。

目前的分析方法存在检测过程繁琐、所用试剂对环境影响较大、操作技术要求较高等问题。检测机构在实际应用时，容易出现检测结果不稳定，精密度和准确度不高，易造成对检测结果的误判，出现漏检或假阳性的现象，从而导致行政管理部门对“瘦肉精”监管不力。

更为重要的是，目前国内外尚没有同时检测农业部禁止使用的这些“瘦肉精”药物的有效方法，因而，对于可乐定、赛庚啶、苯乙醇胺A、氯丙那林等新型“瘦肉精”的非法使用的监管尚没有有效的技术手段，极易造成“监管真空”。

发明内容

克伦特罗等β₂-受体激动剂与靶组织细胞膜β₂-受体结合，进而发生其药理作用，在体内一般为轭合状态，尤其是沙丁胺醇等水杨酸类β₂-受体激动剂轭合比例更高一些。因此，在样品提取前，通常需要通过酶解将轭合态的待测物解离以进一步进行液液萃取。β₂-受体激动剂一般在碱性条件下易溶于有机溶剂，在酸性条件下易溶于水溶液等极性溶剂。由于许多有机溶剂易对环境造成较大压力，因此，本发明拟用酸化的甲醇溶液进行提取，以尽量少的使用有机溶剂，尤其是有毒溶剂；同时，还兼顾可乐定和赛庚啶两种药物在酸化甲醇中的溶解特性，以达到同时提取分析的目的。

为了建立同时检测所有我国农业部规定的禁止在食品动物中使用的“瘦肉精”药物的液相色谱串联质谱法，同时还克服目前分析方法检测过程繁琐、所用卤素试剂对环境影响较大、操作技术要求较高等问题，本发明提供了一种可同时检测动物血液、肌肉、肝脏、肾脏、肺脏等动物组织中可乐定、赛庚啶以及苯乙醇胺A、氯丙那林、克伦特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺、西马特罗、特布他林、班布特罗、齐帕特罗、马布特罗、西布特罗、溴布特罗、福莫特罗、喷布特罗、甲基克伦特罗、沙美特罗、塞布特罗、克仑丙罗、非诺特罗等19种β₂-受体激动剂共计21种“瘦肉精”药物的样品前处理过程。操作过程简单、试剂使用量少，且使用的试剂、操作步骤遵循环境友好型的原则，以尽可能减少对环境造成的破坏。