[发明专利]一种乳酸链球菌紫外诱变菌株及其用途

说明书

技术领域

本发明公开一种乳酸链球菌紫外诱变菌株，为一种新的菌株品种，本发明还提供了该菌株的培育方法，属于微生物培养技术领域。

背景技术

乳链菌肽(Nisin) 是一种微生物代谢所产生的具有很强杀菌作用的天然代谢产物，是世界上公认的安全防腐剂。乳链菌肽容易被人体消化道中的一些蛋白酶和胰蛋白酶降解, 不会在体内蓄积而引起不良反应, 并且对食品的色、香、味等无不良影响, 使用它还可以降低杀菌温度, 减少热处理时间, 因此能改进食品的营养价值、风味、结构和颜色等性状, 同时还可节省能耗。乳链菌肽本身具有热稳定性, 耐酸、耐低温, 作为一种理想的天然防腐剂获得越来越广泛的应用。

在国外，乳链菌肽早就开始了工业化大生产，乳链菌肽的应用也很普遍。但我国在此领域的研究比较落后，生产的乳链菌肽效价较低，是制约乳链菌肽大规模生产和使用的瓶颈。在本发明中，利用紫外诱变选育了一株高产乳链菌肽的乳酸链球菌诱变菌株，对乳链菌肽的深入研究和广泛应用具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种高产乳链菌肽的乳酸链球菌诱变菌株，为一种新的菌株，其产生的乳链菌肽效价和野生菌相比有显著提高。

本发明还提供了该菌株的培育方法。

本发明的乳酸链球菌诱变菌株 JLZLSH1（Lactococcus lactis  JLZLSH1）：已于2013年6月28日保藏在《中国典型培养物保藏中心》，保藏登记号为CCTCC NO.M 2013279。

本发明所述的乳酸链球菌菌株的诱变选育方法，包括以下步骤：

1、将Lactococcus lactis AS1.2030，冻干粉末接入液体小试管培养基中进行活化后，转接至液体摇瓶培养基中，30℃恒温箱中培养8 h，连续传代3次后，接种新的种子液，接种量为3%（v/v），装液量为100 mL；将装有菌悬液的平皿放置在30 w紫外灯下15cm处，处理前先开灯预热20~30 min，稳定后开启磁力搅拌器，使菌悬液能接受均匀照射，启开培养皿盖，照射100 s后立即盖上皿盖；在红光下取诱变液l mL适当稀释，取100 μL涂布于乳链菌肽抗性梯度平板上，用黑布包裹好倒置培养于37 ℃培养箱24 h。

2、待平板上的菌落生长成熟后，挑选乳链菌肽高浓度区的菌落挑到小试管液体培养基中进行活化；装液量为100 mL摇瓶发酵培养；双层琼脂扩散法测定乳链菌肽效价；将乳链菌肽高产菌株挑选出来并立即制成甘油管保存；

3、将筛选获得的菌株在摇瓶中复苏，30℃、150 r/min恒温摇床中培养24 h，连续传代10次，测定每代的乳链菌肽效价。

本发明所述的乳酸链球菌诱变菌株的特征为：

1）诱变菌株在葡萄糖17.3 g/L，牛肉膏26.5g/L，K₂HPO₄·3H₂O 10.5 g/L，酪氨酸3.7g/L的发酵培养基中，乳链菌肽的效价为5800 IU/mL比野生菌提高约5倍。

2）诱变菌株最适发酵条件为：培养温度36℃，摇瓶转速160 rpm，装液量100 mL、接种量4 %，初始pH值为7.8。

本发明的积极效果在于：为一种新的乳酸链球菌菌株，其产生的乳链菌肽的效价为5800 IU/mL比野生菌提高约5倍。

具体实施方法

实施例1： 

将Lactococcus lactis AS1.2030，冻干粉末接入液体小试管培养基中进行活化后，转接至液体摇瓶培养基中，36℃恒温箱中培养8 h，连续传代3次后，接种新的种子液，接种量为3%（v/v），装液量为100 mL（摇瓶容量250 mL）。将装有菌悬液的平皿放置在30 w紫外灯下15cm处，处理前先开灯预热20~30 min，稳定后开启磁力搅拌器，使菌悬液能接受均匀照射，启开培养皿盖，照射100 s后立即盖上皿盖。在红光下取诱变液l mL适当稀释，取100 μL涂布于乳链菌肽抗性梯度平板上，用黑布包裹好倒置培养于37℃培养箱24 h。待平板上的菌落生长成熟后，挑选乳链菌肽高浓度区的菌落挑到小试管液体培养基中进行活化。经250mL摇瓶发酵（装液量为100 mL)，双层琼脂扩散法测定乳链菌肽效价。将乳链菌肽高产菌株挑选出来并立即制成甘油管保存。

实施例2：