[发明专利]一种检测卡那霉素残留的适配体传感器的制备方法

说明书

技术领域

本发明提供一种检测卡那霉素残留的适配体传感器的制备方法，属于生物传感器技术领域。

背景技术

抗生素作为一种治疗疾病的药物，目前已经被广泛应用在乳牛的疾病治疗。无论是通过肌肉注射还是口服，进入奶牛体内的抗生素都是可以以乳牛新陈代谢排出体外，并且奶牛产的牛乳就是乳牛把抗生素类物质排泄出体外的一种比较重要途径。因此牛奶中的抗生素残留在来源方面的问题，一般专家调查认为，泌乳期乳牛的用药不当或者安全时间不注意问题都会成为牛奶中的抗生素残留的重要的两个因素，特别是使用乳房灌注法治疗乳腺炎时，易造成牛乳中抗生素残留。目前，在牛饲料中添加化学添加剂已经十分普遍，其中抗生素会占据一定的比例，它的主要是用来预防奶牛疾病，所以这样牛奶抗生素残留的重要原因。此外，一些不法交奶户在高温季节为防止乳的酸败，往往向牛乳中掺杂各种抗生素，这也是乳中抗生素残留的一个来源。卡那霉素（kanamycin）：一种由卡那链霉菌(Streptomyces kanamyceticus)产生的氨基糖苷类抗生素，含三个组分：卡那霉素A、B和C，卡那霉素A为主要组分。卡那霉素是一种蛋白质生物合成抑制剂，通过与30S核糖体结合从而致使mRNA密码误读。若细菌中产生一种破坏卡那霉素的酶，则可变为抗性株。卡那霉素抗性的质粒经常被作为选择基因或标记基因用于分子克隆中。卡那霉素的主要毒副作用体现为对于脑神经、听觉以及肾脏的损害，因此，针对该类药物在食品中的残留，许多国家和机构都规定了明确的最大残留限量（MRL s）。由于养殖过程中经常存在着违法使用或者不合理使用的现象，牛奶中卡那霉素的过量残留，已经成为国内外普遍关注的食品安全问题之一。

抗生素残留的检测方法：抗生素残留的检测方法多种多样，每种方法都有各自特点，适应在不同条件下检测，在选用各种方法是我们应当根据简便易用、精确可靠的原则。常用的抗生素残留检测方法有气相色谱法（GC）、光谱法、高效液相色谱法（HPLC）、薄层色谱法（TLC）、适配体分析法等。这些分析方法虽然具有高选择性，但是其操作繁琐、耗时长、成本高，并且需对样品进行预浓缩和衍生处理，所以很难得到广泛应用。因此,人们会更加急切的需要快速、可靠、经济和适合于现场应用的快速检测方法。于是,快速、可信、廉价、敏感的适配体生物传感器应运而生。与传统的分析方法相比,适配体生物传感器具有待测的样品不用经过预先处理、分析速度快、操作系统简单、准确度高、专一性强、成本低、响应快等优点。 

发明的目的在于提供一种能克服上述缺陷以及操作简单、灵敏度高、选择性好的检测卡那霉素残留的适配体传感器的制备方法。

其技术方案为：一种检测卡那霉素残留的适配体传感器的制备方法，其特征在于：适配体传感器的敏感界面组成包括由硫堇、石墨烯-聚苯胺复合膜和纳米金胶(AuNPs)，进而固定卡那霉素适配体。

所述的一种检测卡那霉素残留的适配体传感器的制备方法，其特征在于：金电极(d=3mm)的清洗，适配体传感器敏感界面的构建及过程表征(制备石墨烯-聚苯胺纳米复合物，利用硫堇、石墨烯-聚苯胺和纳米金胶的协同作用共同修饰电极)，适配体传感器工作曲线的建立，适配体传感器性能的检测，适配体传感器对实际样品的检测。

所述的一种检测卡那霉素残留的适配体传感器的制备方法，其特征在于：实验条件的优化，主要包括适配体浓度、测试底液的pH以及测试时间和温度；所制备的适配体传感器的工作曲线为：y = 0.0327x + 0.2585 （R² = 0.9954）；适配体传感器性能检测包括重现性、稳定性、再生性、特异性以及适配体传感器对牛奶样品回收率的测定。