[发明专利]观赏海棠花色苷的测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及针对花卉的检测方法，特别是涉及一种用于测定观赏海棠花的色苷的检测方法。

背景技术

花青素是广泛存在于被子植物中的一类重要的类黄酮化合物，它是植物花朵，叶片和果实色泽形成的重要的物质基础之一。在自然界中，花青素常与不同种类的糖苷相结合，以花色苷的形式存在于植物中。关于植物体内成色物质的研究开始于19世纪中叶，至今已发现了很多种色素，但都可以归成下述三大类色素：类胡萝卜素(carotenoid)、生物碱类色素（alkaloid）和类黄酮（flavonoid）。类胡萝卜素是胡萝卜素（carotenes）和叶黄素（carotol）的统称，类胡萝卜素中所含的共轭双键构成生色团，表现出黄、橙、红、紫等颜色（参考：Goodwin T W,Britton C.Dostribution and analysis of carotenoids.In:Goodwin T W ed.Plant Pigments,1988,61-132.Academic Press,London.）。生物碱类色素（alkaloid）是含负氧化态氮原子的环状有机物，生物碱色素包括甜菜碱(betaine)、婴粟碱(papaverine)、小巢碱(berberine)等；婴粟碱使婴粟属(Papaver)和绿绒篙属(Meconopssi)的花表现黄色；小聚碱即黄连素，使小璧属(Berberis)的花表现深橙色或黄色。（参考文献：郑志亮.1994.花卉作物的花色基因工程.北方园艺,(3)，37一38.）

）类黄酮（flavonoid）是一类具有黄烷核基本骨架（C6-C3-C6）的低分子量多酚化合物的总称，是色原酮（Chromone）或色原烷（chromane）的衍生物。根据类黄酮物质单体化学结构可以分为四大类：黄酮（flavone)、黄烷酮(flavanone)、黄酮醇(flavono1)和花色苷（anthocyanin）。其中，花色苷(anthocyanins)是最重要的类黄酮类色素，也是植物呈现红、粉、紫、蓝等不同颜色的主要决定因素。大约88%的被子科植物花的颜色改变是由花色苷所决定的。

1978年，随着Wulf和Nagel第一次使用液相色谱对葡萄品种“赤霞珠”果皮中的花青素种类进行分离和鉴定，开创了花青素色谱研究的新纪元。高效液相色谱法检测植物中花青素的含量，具有进样量少，分析效率较高，分析时间短，灵敏度较高，检测完流出的组分可回收利用等系列有点。近年来，随着各种不同类型检测器的进一步应用，植物中各种类黄酮物质被成功地鉴定出来（参考文献：Jia N,Shu QY,Wang LS,et al.2008.Analysis of petal anthocyanins to investigate coloration mechanism in herbaceous peony cultivars.Sci.Hortic(Amsterdam).117:167-173.）。例如：根据不同的类黄酮具有不同吸收光谱这一原理，可以采用带有光电二极管阵列检测器（DAD）的HPLC对分离的类黄酮成分进行全波长扫描，然后用获得的吸收光谱与标准品对照来鉴定类黄酮的化学结构。但现有的花色苷提取方法中，得到叶片制成的粉末，并加入花色苷提取液后形成的样品，要将样品于4℃冰箱内避光浸提72小时；期间每六小时震荡一次，于24小时，48小时处收集上清液，并再向样品中加入等量花色苷提取液；72小时后，将3次收集的上清液进行合并，这样提取液必须长时间（过夜）浸泡植物材料而影响测定结果不准确的问题。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种观赏海棠花色苷的测定方法，能在一天之内准确测定观赏海棠花色苷的含量，从而解决目前对观赏海棠花色苷含量测定时，

解决上述技术问题的技术方案如下：

本发明提供一种观赏海棠花色苷的测定方法，包括：

步骤1，将经液氮速冻后的观赏海棠花叶片放入研钵中，加入石英砂和非溶性交联聚乙烯吡咯烷酮，加入液氮研磨成粉末；

步骤2，将所述粉末转入试管中，加入花色苷提取液，之后在45℃超声提取60min得到；

步骤3，将提取的所述花色苷提取液进行纯化处理，12000转/分钟离心3min，得到上清液装于安捷伦上样瓶中用于HPLC检测；