[发明专利]一种CRP/PCT联合诊断试纸及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物医学检测技术领域，尤其涉及一种CRP/PCT联合诊断试纸及其制备方法。

背景技术

在急诊治疗和重症监护过程中，快速而准确的评估细菌脓毒症严重程度是医师必须面临的挑战。C-反应蛋白（C-reactive protein，CRP）和降钙素原（Procalcitonin，PCT）的引入，为早期感染诊断和治疗反应评估提供了有效的方法。荧光免疫层析是一种建立在荧光层析技术和抗原-抗体特异性免疫反应基础上的一种免疫检测技术，荧光免疫层析试纸一般包括依次设于底板上且紧密搭接的样品垫、结合垫、反应膜和吸水垫，底板设于塑料卡内，塑料卡上设有分别与样品垫和反应膜配合的加样孔和显示窗口。

CRP是由肝脏合成的一种能与肺炎链球菌C多糖体反应形成复合物的一种急性时相反应蛋白。它由5个相同的亚基单位以非共价方式联结。CRP不仅对感染性疾病、妊娠期糖尿病的病程检测及预后判断评估、抗生素疗效等具有重要的临床应用前景，同时也是心血管疾病最重要的预测因子之一。正常人血清中CRP含量极微。一般新生儿血清CRP水平小于2mg/L，大于此值即与细菌感染的严重程度有关；儿童和成人血清CRP水平小于10mg/L；10-99mg/L提示局灶性或浅表性感染，大于或等于100mg/L提示败血症或侵袭性感染等严重感染。CRP在感染发生后6-8h开始升高，24-48h达到高峰，比正常值高几百倍甚至上千倍，升高幅度与感染的程度呈正相关。在疾病治愈后其含量急速下降，一周内可恢复正常。临床上CRP一般作为鉴别细菌或病毒感染的一个首选指标，用于自身免疫性及感染性疾病的诊断和监测，以及抗生素疗效观察等。低水平的CRP，又称超敏C-反应蛋白（hs-CRP）。在心血管疾病的诊断中，hs-CRP被认为是心血管炎症病变的生物标志物。在无炎症或感染条件下（代谢稳定下），通常认为：hs-CRP＜1mg/L时为低危险性；1-3mg/L为中度危险；大于3mg/L为高危险性。

PCT是降钙素的前驱物质。正常情况下，降钙素在受到荷尔蒙刺激后仅由甲状腺的C细胞分泌，其浓度通常小于0.1ng/mL。而在促炎症刺激下，特别是在受到细菌感染时，PCT由大量各类细胞产生。当PCT浓度在0.1-0.25ng/mL时，不太可能感染细菌；0.25-0.5ng/mL时可能感染细菌；大于0.5ng/mL时非常可能感染细菌，需要使用抗生素治疗。

PCT与CRP相比，在感染刺激下的3-6小时内即可观察到PCT不断上升，随着感性的加重PCT不断升高。此外，CRP在病毒和细菌性疾病中均能出现，而PCT只有在细菌性感染的疾病中才能出现。因此，PCT作为诊断指标具有快速和特异性强等特点。而联合应用CRP和PCT，将能更为准确的判断炎症的感染程度。在评估心血管疾病的危险程度时，为了避免个体间的差异，hs-CRP的检测通常应排除炎症感染。因此，CRP和PCT的联合将非常重要。因此，PCT和CRP的联合应用，将比二者单独使用时应用范围更广，更便捷，诊断结果也更为准确。

量子点是一种由一定数量的实际原子组成的聚集体，三维尺寸均小于100nm的半导体化合物。它具有发光强度高、激发光谱宽、发射光谱窄、荧光寿命长、表面修饰多功能化和稳定性好等众多优点，在荧光检测领域具有取代传统有机荧光染料的潜力，已成为新一代生物荧光标记物。

发明内容

本发明解决的技术问题是基于CRP与PCT联合诊断的优势，以及量子点的荧光特性，提供一种灵敏度高、快速、准确的PCT/CRP联合诊断试纸。

为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：

一种CRP/PCT联合诊断试纸，包括设于底板上且依次紧密相连的样品垫、结合垫、反应膜和吸水垫，所述底板设于塑料卡内，所述底板的中部纵向设有一防渗水胶条，所述防渗水胶条将样品垫、结合垫、反应膜和吸水垫分隔为第一样品垫、第二样品垫、第一结合垫、第二结合垫、第一反应膜、第二反应膜、第一吸水垫和第二吸水垫；所述第一结合垫上固定有标记CRP抗体Ⅰ，所述第二结合垫上固定有标记PCT抗体Ⅰ，所述第一反应膜和第二反应膜均设有定量带和质控带。

所述标记CRP抗体Ⅰ为量子点标记的CRP抗体Ⅰ，所述标记PCT抗体Ⅰ为量子点标记的PCT抗体Ⅰ。所述量子点标记的CRP抗体Ⅰ与量子点标记的PCT抗体Ⅰ具有不同的发射波长。

所述第一反应膜上设有第一定量带和第一质控带，所述第一定量带固定有与标记CRP抗体Ⅰ具有不同抗原结合位点的CRP抗体Ⅱ，所述第一质控带固定有标记CRP抗体Ⅰ的二抗。