[发明专利]青虾EST-SSR分子标记的引物组、标记方法及应用

权利要求书

1.一种青虾EST-SSR分子标记的引物组，其特征在于，包括有如下3个位点所对应的正向和反向引物：

EWXM33：SEQ ID NO.1～2；

EWXM62：SEQ ID NO.3～4；

EWXM147 ：SEQ ID NO.5～6。

2.一种基于权利要求1所述的EST-SSR分子标记的引物组的青虾分子标记方法，包括如下步骤：

第1步、提取青虾样本的DNA；

第2步、使用分子标记引物组对青虾样本进行PCR扩增；

第3步、对扩增产物进行电泳分析，利用电泳结果对青虾进行分类。

3.根据权利要求2所述的青虾分子标记方法，其特征在于：所述的PCR扩增中，反应体系包括有：2.5mM dNTP 1μL，10×Buffer 2.5μL，25mM MgC1₂ 2μL，8pmol/μL的两侧引物各0.75μL，5 U Taq DNA 聚合酶0.2μL，50ng/μL的DNA模板2μL，用超纯水补足至25μL。

4.根据权利要求2所述的青虾分子标记方法，其特征在于：所述的PCR扩增中，优选的扩增程序是：94℃预变性5min；94℃变性30s, Tm 30s, 72℃45s, 共30个循环；最后72℃延伸7min；4℃保存；所述的Tm是指：SEQ ID NO.1～2 54℃、SEQ ID NO.1～2 52℃、SEQ ID NO.5～6 50℃。

5.根据权利要求2所述的青虾分子标记方法，其特征在于：优选的电泳分析的参数是：采用10%的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳中进行检测，电压200V，电泳时间3～4小时，电压完毕后用染料染色10～15分钟。

6.权利要求1所述的EST-SSR分子标记的引物组在青虾群体遗传多样性分析中的应用。