[发明专利]一种利用干耳片快速分离木耳菌种的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种食用菌的菌种分离方法，具体地说是一种利用干耳片快速分离木耳菌种的方法。

背景技术

木耳[Auricularia auricula(L.ex Hook.)Underw.]又名黑木耳、光木耳、细木耳等，是木耳属中最重要的一种食药兼用大型真菌。木耳的栽培在我国有着悠久的历史，早在2100年前《周礼》上就有记载。木耳肉质细腻，脆滑爽口，蛋白质含量十分丰富，铁比肉类高10倍，钙是肉类的20倍，还含有很多重要氨基酸和微量元素，因此有“素中之荤”的美称。木耳不仅有营养价值，还具有一定的药用价值。传统中医认为，木耳性平、味甘，有凉血、止血功效，还有补气、益智、生血功能，有润肺和洗涤肠胃的作用；现代科学研究表明，木耳具有抗凝血、抗肿瘤、抗炎症等细胞保护作用，还具有降低血脂、血糖、血液黏度、胆固醇以及抗糖尿病、抗衰老、抗辐射等多种生理功能。

我国是世界上主要的木耳生产国，目前其栽培遍布20多个省(市、区)，年产量占世界总产量的90％以上，稳居世界第一，在国际市场上享有较高的声誉。在木耳生产中，要想得到理想的栽培效果，必须有优良的菌种。菌种在制种过程中，由于保存方法不当、没有及时转接和转接代数过多等因素的影响，常会引起菌种退化。菌种分离是防止菌种退化，获得优良菌种的重要手段。

木耳菌种分离常采用三种方法，即耳木分离、组织分离和孢子分离。耳木分离污染严重，又有耳木采集方面的困难；孢子分离获得的菌种不一定能保持亲本特性；组织分离多用鲜耳直接分离或将干耳用水泡湿后再分离。目前采用干耳分离的，或是所用药品毒性大，对人存在危害且影响木耳菌丝的萌发和生长；或是分离步骤繁琐，时间过长且成功率低。

发明内容

针对上述现有方法的一些不足，本发明所解决的是木耳菌种分离方法中存在的操作复杂、时间长、成本高、菌丝分离成功率低等问题。提供的是一种利用干耳片快速分离木耳菌种的新方法，其具有操作简单、分离快速、取材容易(包括药品)、成本低、分离成功率高，菌丝萌发快，洁白浓密，长势强等诸多优点，为广大制种工作者提供一种快速简便的木耳菌种分离新方法。

本发明所采用的技术方案如下：一种利用干耳片快速分离木耳菌种的方法，如下：

步骤一：将干耳片用手掰成小耳片：

首先挑选肉质厚、朵型大、颜色纯正且无病虫害的野生或栽培的干木耳片，掰取远离耳基的平坦部位，掰成长度大小为0.8-1.0cm、宽度大小为0.4-0.6cm的小耳片；

步骤二：将小耳片第一次在无菌水中涮洗并用三层吸水纸充分吸干水分：

将无菌水倒入无菌培养皿里，倒入的量培养皿体积的五分之四，将上述掰取的小耳片，放入无菌水中，涮洗5-7s，取出，放入三层无菌吸水纸上，充分吸干小耳片表面的水分；

步骤三：将小耳片放入体积分数为75％的酒精中浸泡并用三层吸水纸充分吸干：

将体积分数为75％的酒精倒入无菌培养皿里，倒入的量是培养皿体积的四分之三，用无菌镊子夹起步骤二中的小耳片，放入酒精中，浸泡20-25s，让其与酒精充分接触，取出，放入三层无菌吸水纸上，充分吸收小耳片表面的酒精；

步骤四：将小耳片第二次在无菌水中涮洗并用三层吸水纸充分吸干水分：

将无菌水倒入无菌培养皿里，倒入的量大约是培养皿体积的五分之四，将步骤三中的小耳片，放入无菌水中，涮洗小耳片5-7s，取出，放入三层无菌吸水纸上，充分吸收小耳片表面的水分；

步骤五：将小耳片插入平板PDA培养基中恒温培养、观察：

将步骤四中的小耳片，插入到平板PDA培养基中，插入的部分为小耳片的1/5-1/4，每个培养皿插入3个小耳片，3个小耳片呈等边三角形排列，用封口膜封口后，放入恒温培养箱中，25℃避光倒置培养，定期观察；

步骤六：挑取萌发出的菌丝接种至斜面PDA培养基中进行纯化培养：

待步骤五中的小耳片萌发长出洁白致密的菌丝时，选取黄豆粒大小的菌丝块，接种于斜面PDA培养基中，25℃恒温避光培养，待要长满斜面时，放于4℃冰箱中保存；

其中上述各步骤都是在无菌条件下进行操作的。

所述的PDA培养基中琼脂的含量为8-10g/L。

本发明主要具有如下优点：

1、本发明操作简单易行，所需材料少，不仅科技人员便于应用，非专业人员也容易掌握；

2、本发明分离木耳菌种的菌丝具有生长快、菌丝粗壮、生命力强、菌丝洁白等优点；