[发明专利]一种利用干耳片快速分离木耳菌种的方法

权利要求书

1.一种利用干耳片快速分离木耳菌种的方法，其特征在于，步骤如下：

步骤一：将干耳片用手掰成小耳片：

首先挑选肉质厚、朵型大、颜色纯正且无病虫害的野生或栽培的干木耳片，掰取远离耳基的平坦部位，掰成长度大小为0.8-1.0cm、宽度大小为0.4-0.6cm的小耳片；

步骤二：将小耳片第一次在无菌水中涮洗并用三层吸水纸充分吸干水分：

将无菌水倒入无菌培养皿里，倒入的量培养皿体积的五分之四，将上述掰取的小耳片，放入无菌水中，涮洗5-7s，取出，放入三层无菌吸水纸上，充分吸干小耳片表面的水分；

步骤三：将小耳片放入体积分数为75％的酒精中浸泡并用三层吸水纸充分吸干：

将体积分数为75％的酒精倒入无菌培养皿里，倒入的量是培养皿体积的四分之三，用无菌镊子夹起步骤二中的小耳片，放入酒精中，浸泡20-25s，让其与酒精充分接触，取出，放入三层无菌吸水纸上，充分吸收小耳片表面的酒精；

步骤四：将小耳片第二次在无菌水中涮洗并用三层吸水纸充分吸干水分：

将无菌水倒入无菌培养皿里，倒入的量是培养皿体积的五分之四，将步骤三中的小耳片，放入无菌水中，涮洗小耳片5-7s，取出，放入三层无菌吸水纸上，充分吸收小耳片表面的水分；

步骤五：将小耳片插入平板PDA培养基中恒温培养、观察：

将步骤四中的小耳片，插入到平板PDA培养基中，插入的部分为小耳片的1/5-1/4，每个培养皿插入3个小耳片，3个小耳片呈等边三角形排列，用封口膜封口后，放入恒温培养箱中，25℃避光倒置培养，定期观察；

步骤六：挑取萌发出的菌丝接种至斜面PDA培养基中进行纯化培养：

待步骤五中的小耳片萌发长出洁白致密的菌丝时，选取黄豆粒大小的菌丝块，接种于斜面PDA培养基中，25℃恒温避光培养，待要长满斜面时，放于4℃冰箱中保存；

其中上述各步骤都是在无菌条件下进行操作的。

2.根据权利要求1所述的一种利用干耳片快速分离木耳菌种的方法，其特征在于：所述的PDA培养基中琼脂的含量为8-10g/L。