[发明专利]一种基于酪胺信号放大技术和适配体识别的金黄色葡萄球菌可视化检测方法

权利要求书

1.一种基于酪胺信号放大技术和适配体识别的金黄色葡萄球菌可视化检测方法，其特征在于：通过生物素修饰的金黄色葡萄球菌适配体将样品中的金黄色葡萄球菌捕获并将其固定到链霉亲和素包被的酶标板底部，另一条生物素标记的金黄色葡萄球菌的适配体将链霉亲和素标记的HRP(Streptavidin-HRP)引入检测体系中，然后经过酪胺信号放大技术使信号实现几何级的放大，最后加入TMB显色试剂和终止液，利用酶标仪检测吸光度值，基于此建立检测的标准曲线，达到检测金黄色葡萄球菌的目的。

2.如权利要求1所述的一种基于酪胺信号放大技术和适配体识别的金黄色葡萄球菌可视化检测方法，其特征在于生物素-酪胺的制备：准确称取10mg Bio-NHS,溶于1mL DMF中制成溶液A；称取2.8mg的酪胺盐酸，溶于0.28mLDMF中，然后加入2.8μL的三乙胺，制成溶液B；将溶液A与溶液B充分震荡混匀，然后在室温下避光反应2h，加入8.72mL无水乙醇，从而制得10mL生物素-酪胺溶液，并于4℃环境避光保存。

3.如权利要求1所述的一种基于酪胺信号放大技术和适配体识别的金黄色葡萄球菌可视化检测方法，其特征在于酪胺信号放大技术：将生物素标记的金黄色葡萄球菌的适配体与链霉亲和素标记的HRP(Streptavidin-HRP)按4：1的比例混匀，37℃孵育30min，每孔加入10μL的适配体和Streptavidin-HRP的复合物，取10μL的生物素-酪胺溶液，加到酶标板中，然后再加入5μL0.5％(v／v)的过氧化氢(H₂O₂)，37℃孵育30min，在酶标板的每个微孔中加入10μL的Streptavidin-HRP，37℃孵育30min。