[发明专利]南方根结线虫食道腺特异基因Msp40及其编码蛋白和其应用

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种南方根结线虫（Meloidogyne incognita）食道腺特异基因及其编码蛋白和其作为潜在RNA干扰靶标基因的应用。

背景技术

根结线虫（Meloidogyne spp.）是一类固着型内寄生植物病原线虫。根结线虫寄主范围广，适应性强，对农业生产危害严重，造成巨大经济损失。在我国以南方根结线虫（M.incognita）分布最广，危害最大，严重威胁我国南方露地及北方保护地农业生产安全。轮作及化学防治等传统的线虫防治方法，存在特异性差、副作用大、防效有限等突出问题。而RNA干扰作为一种新的防治策略及技术，为抗线虫基因工程带来新的突破。通过构建RNA干扰载体，导入植物中表达线虫寄生致病相关基因的双链RNA（dsRNAs）或小干扰RNA(siRNAs)，经口针取食进入线虫体内，引发系统性RNA干扰反应，导致线虫寄生、发育、代谢、运动等相关功能出现障碍甚至死亡，从而使转基因植物实现对寄生线虫的抗性。相关研究表明，食道腺在根结线虫与寄主互作致病过程中发挥重要作用。多数推测的寄生致病相关基因均在线虫食道腺表达，编码产生分泌蛋白，再经由口针穿刺和注射进入植物细胞内，发挥寄生致病相关的复杂功能。

发明内容

本发明的目的是提供一种南方根结线虫（Meloidogyne incognita）食道腺特异基因Msp40及其编码蛋白和其作为潜在RNA干扰靶标基因的应用。

本发明的一个目的是提供一种蛋白，是如下（a）或（b）：

（a）由序列表中SEQ ID №.2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

（b）将序列表中SEQ ID №.2所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与线虫致病力相关的由序列2衍生的蛋白质。

上述一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加是指不多于十个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加。

所述线虫致病力的判断指标具体为寄主单株根结数目或线虫卵数。

编码上述蛋白的核酸分子也属于本发明的保护范围。

所述核酸分子可以是DNA，如cDNA、基因组DNA或重组DNA；所述核酸分子也可以是RNA，如mRNA、hnRNA或tRNA等。

编码上述蛋白的基因也是本发明保护的范围。

上述基因为如下1）-4）中任一种的DNA分子：

1）序列表中SEQ ID №：1第75-1019位的核苷酸序列；

2）编码序列表中SEQ ID №：2蛋白质序列的多核苷酸序列；

3）在高严谨条件下可与序列表中SEQ ID №：1限定的DNA序列杂交的核苷酸序列；

4）与1）或2）或3）限定的DNA序列具有90％以上同源性，且编码相同功能蛋白质的DNA序列；具体的，所述同源性为95%以上；再具体的为96%以上；再具体的为97%以上；再具体的为98%以上；再具体的为99%以上。

上述严格条件也可为：在6×SSC，0.5%SDS的溶液中，在65℃下杂交,然后用2×SSC,0.1%SDS和1×SSC,0.1%SDS各洗膜一次。

其中，序列表中SEQ ID №：1的核苷酸序列全长1217bp，第1-74位核苷酸为5’非翻译区，第1023-1217位核苷酸为3’非翻译区，第75-1019位核苷酸为开放阅读框，编码SEQ ID №.2所示氨基酸序列，将该具有序列表中SEQ ID №：1中第75-1019位的核苷酸序列的片段命名为Msp40。

含有下述1）或2）所述核酸片段的重组载体、表达盒、转基因细胞系或宿主菌也是本发明保护的范围：

1）编码所述蛋白的核酸分子全长或其任意片段；所述核酸分子可以是DNA，也可以是RNA；

2）所述的编码基因全长或其任意片段。

上述重组载体具体为克隆载体、表达载体中或RNA干扰载体。

扩增上述基因全长或其任意片段的引物对也是本发明保护的范围。

本发明的另一个目的是提供一种dsRNA，所述dsRNA具有下述核苷酸序列之一：

1）序列表中SEQ ID №：3所示的核苷酸序列；

2）在高严谨条件下可与序列表中SEQ ID №：3限定的核苷酸序列杂交的核苷酸序列；