[发明专利]一种植物乳杆菌、其细菌素以及培养与分离纯化方法

权利要求书

1.一种植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）163，菌种保藏号为CGMCC NO.8224。

2.一种细菌素，其特征在于，由权利要求1所述的植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）163发酵得到。

3.根据权利要求2所述的细菌素，其特征在于，具有SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。

4.根据权利要求2所述的细菌素，其特征在于，具有SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列。

5.一种权利要求2所述的细菌素的制备方法，其特征在于，由植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）163通过下述步骤培养发酵得到：

（1）植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）163种子液制备：将保藏的菌种，接种于MRS液体培养基中，37℃静置培养12-16 h；

（2）植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）163发酵：将活化的种子液，按体积百分比为1 %接种于MRS液体培养基或者白菜番茄培养基，在MRS液体培养基静置培养24 h或白菜番茄培养基静置培养30 h后，5000 rpm离心即得含细菌素的发酵液。

6.根据权利要求5所述的细菌素的制备方法，其特征在于，步骤（2）中所述的白菜番茄培养基配方为葡萄糖10 g，白菜汁200 mL，番茄50 mL，蒸馏水750 mL，pH 6.5。

7.一种权利要求2或3或4所述的细菌素的分离纯化方法，其特征在于，先将植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）163进行培养发酵，然后采取以下步骤进行：

（1）硫酸铵沉淀纯化：先将植物乳杆菌 MRS发酵液浓缩，浓缩液加入粉末状硫酸铵至饱和度60%，搅拌均匀， 4℃下离心完全后取上清液继续加入粉末状硫酸铵至饱和度85%，搅拌均匀， 4℃下离心完全，得沉淀，沉淀用蒸馏水溶解；

（2）Sephadex G25纯化：将硫酸铵沉淀下来的样品进行浓缩，吸取样品，打开装好Sephadex G25柱材料的柱下面的阀门，打开恒流泵，用纯净水充分洗脱，调节流速，利用自动收集器收集馏分；

（3）Sephadex LH-20纯化：Sephadex LH-20装柱，G25纯化出来的活性馏分冻干后加入蒸馏水溶解，上样，用80 %甲醇洗脱，流速1.5 mL/9 min，每馏分接1.5 mL，收集馏分，纯化后得到两个活性洗脱峰；

（4）HPLC纯化：第一个活性洗脱峰，利用反相高效液相色潽法纯化，纯化条件：C18柱，A:水+0.1 %TFA，B：乙腈+0.1 %TFA，Time：60 min，A: 95 %-5 %，B:5 %-95 % 梯度洗脱，波长：267 nm，流速0.4 mL/min；第二个活性洗脱峰，纯化条件：95%A+5%B等度洗脱，A：水+0.1%TFA，B：乙腈+0.1%TFA，时间：40min，柱子：C18柱，流速3mL/min，检测波长267nm。

8.权利要求2或3或4所述的细菌素在食品防腐中的应用。

9.权利要求2或3或4所述的细菌素在制备抗菌性药物中的应用。