[发明专利]重组猪圆环病毒2型病毒样粒子及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明属于猪圆环病毒2型技术领域，尤其涉及一种重组猪圆环病毒2型病毒样粒子及其制备方法和应用。

背景技术

猪圆环病毒(Porcine circovirus，PCV)是作为一种猪肾细胞系PK-15培养污染物而被发现的，其基因组为共价闭合的单股环状DNA分子，基因组全长约1.7kb。PCV是迄今为止人们发现的最小动物病毒，病毒粒子表面无囊膜，呈二十面体对称，粒子直径在17-20nm之间。根据PCV的致病性、血清型和基因型特点，将其分为非致病性的PCV1和致病性的PCV2两种类型。其中，PCV2是引起猪圆环病毒病（PCVD）的主要病原。PCV2基因组全长为1767bp或1768bp，由11个开放阅读框（ORF）组成，ORFs之间差异悬殊，并且大部分ORFs都有部分重叠，ORF1和ORF2是PCV2最大的编码基因，ORF1编码与病毒基因组复制相关的Rep蛋白，而ORF2编码病毒的主要结构蛋白Cap。Cap蛋白是组成病毒衣壳的唯一结构蛋白和主要的抗原表位聚集区，其氨基末端有序列高度保守的精氨酸富集区，与病毒DNA的结合密切相关，Cap蛋白是公认的PVC2的主要保护性抗原。

众所周知，疫苗是防控传染病的最有效手段。2006年，法国梅里亚公司率先研制出经欧盟认证的首例PCV2全病毒灭活苗；在国内，刘长明等成功研制出我国首例PCV2灭活苗（LG株），此外姜平等研制的PCV2疫苗（SH株）也已注册上市，这两种疫苗的成功研制和应用一定程度上防控了我国PCV2的流行。但是，由于灭活苗具有免疫持续时间短，免疫注射副作用大，不能刺激机体产生细胞免疫等缺点，使得其免疫效果不尽人意。弱毒苗通常能诱导机体产生坚实的免疫力和持久保护力，但是弱毒苗毒力易反强、致弱毒力评价难，安全性存在隐患，因此国内外对PCV2弱毒苗的研究鲜有报道。DNA疫苗有制备简单、免疫效果好等诸多优点，但由于缺少高效的基因输送系统，外源基因在体内的表达调控及其在体细胞间的转移，可能会产生意外的免疫病理反应等瓶颈问题难以突破使得大部分DNA疫苗的研究仅局限于实验室。其它一些重组病毒疫苗、亚单位疫苗对PCV2有一定的保护效果，但都由于安全性低，免疫效果差等种种原因还处于研发阶段。因此，克服目前PCV2活苗、灭活苗以及基因工程疫苗缺点，寻找新的技术策略，研发一种安全、高效非复制的病毒疫苗是有效免疫防控PCV2的重要科学前提。

病毒样粒子（Virus-like particles，VLPs），是由病毒主要衣壳蛋白或包膜蛋白自主包装形成的衣壳结构，不含有遗传物质，其形态、大小、结构及表面抗原和多肽表位与天然病毒粒子非常相似，因而能够被宿主抗原提呈细胞所识别，能有效刺激机体产生体液免疫和细胞免疫应答，具有良好的免疫原性，并且无潜在的毒副作用。目前，国外已有部分VLPs疫苗上市，如乙肝VLPs疫苗、乳头瘤VLPs疫苗、流感VLPs疫苗等，此外还有戊型肝炎VLPs疫苗等多个品种在临床研究中，显示出该类疫苗的巨大潜力。研究证实，PCV2的Cap蛋白在体外表达过程中具有自我组装成病毒样粒子的特点，近年来，先后有利用大肠杆菌表达系统、酵母表达系统和昆虫/杆状病毒表达系统在体外制备出Cap蛋白的VLPs，在小鼠和猪体内免疫实验中，这些病毒样粒子都表现出良好的免疫原性。来源于HSV-1VP22转录因子的转导域具有强大的蛋白转导功能，能将与其偶联的外源蛋白带入细胞并通过MHC-I类分子介导的抗原提呈，激发抗原特异性CTL效应。VP22转导域的功能已广泛应用于DNA疫苗及肿瘤疫苗的研究中。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种重组猪圆环病毒2型病毒样粒子及其制备方法和应用。

为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：Cap-VP22融合基因，该基因由融合PCV2Cap蛋白基因和VP22蛋白转导域核苷酸序列形成。

上述Cap-VP22融合基因，具有序列表SEQ.ID.No.1的碱基序列。

上述Cap-VP22融合基因在制备预防猪圆环病毒病（PCVD）的疫苗（PCV2疫苗）中的应用。

重组猪圆环病毒2型病毒样粒子，该病毒样粒子由融合PCV2Cap蛋白基因和VP22蛋白转导域核苷酸序列形成的Cap-VP22融合基因所编码。

上述重组猪圆环病毒2型病毒样粒子，具有序列表SEQ.ID.No.2的氨基酸序列。