[发明专利]重组猪圆环病毒2型病毒样粒子及其制备方法和应用

权利要求书

1.Cap-VP22融合基因，其特征在于：该基因由融合PCV2Cap蛋白基因和VP22蛋白转导域核苷酸序列形成。

2.根据权利要求1所述的Cap-VP22融合基因，其特征在于具有序列表SEQ.ID.No.1的碱基序列。

3.权利要求1所述Cap-VP22融合基因在制备预防猪圆环病毒病的疫苗中的应用。

4.一种重组猪圆环病毒2型病毒样粒子，其特征在于：该病毒样粒子由融合PCV2Cap蛋白基因和VP22蛋白转导域核苷酸序列形成的Cap-VP22融合基因所编码。

5.根据权利要求4所述的重组猪圆环病毒2型病毒样粒子，其特征在于具有序列表SEQ.ID.No.2的氨基酸序列。

6.根据权利要求5所述重组猪圆环病毒2型病毒样粒子的制备方法，其特征在于：将来源于HSV-1VP22的蛋白转导域通过SOE-PCR方法与形成PCV2空衣壳蛋白所需的抗原Cap基因连接起来，克隆到杆状病毒转运载体获得同源重组载体，包装产生含有PCV2Cap蛋白和HSV-1VP22蛋白转导域的重组杆状病毒，感染昆虫细胞，表达融合了PCV2Cap蛋白和HSV-1VP22蛋白转导域的重组Cap-VP22蛋白，形成病毒样粒子。

7.根据权利要求6所述重组猪圆环病毒2型病毒样粒子的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）克隆目的基因Cap-VP22，并通过BamHI/NotI和NheI/KpnI双酶切位点分别在pFastBac Dual转移载体P10和Ph启动子之后各插入一个拷贝的目的基因Cap-VP22，获得含双拷贝目的基因的重组杆状病毒转移载体pFastBac Dual-2Cap-VP22；

（2）用步骤（1）获得的pFastB Dual-2Cap-VP22转移载体转化DH10Bac感受态细胞，进行同源重组；

（3）筛选鉴定获得携带有目的基因Cap-VP22的重组杆状病毒DNA；

（4）用步骤（3）获得的重组杆状病毒DNA以脂质体法转染对数生长期的Sf9细胞，产生表达融合基因Cap-VP22的重组杆状病毒；

（5）用步骤（4）获得的重组杆状病毒感染对数生长期的Sf9细胞，使感染细胞表达Cap-VP22基因；

（6）收集步骤（5）获得的感染细胞培养液并裂解感染有Cap-VP22基因重组杆状病毒的宿主细胞，纯化获得重组猪圆环病毒2型病毒样粒子。

8.权利要求3所述重组猪圆环病毒2型病毒样粒子在制备预防猪圆环病毒病的疫苗中的应用。