[发明专利]一种生产2-KLG的氧化葡萄糖酸杆菌基因工程菌及其应用

权利要求书

1.一种生产2-KLG的氧化葡萄糖酸杆菌(Gluconobacter oxydans)基因工程菌，其特征在于表达外源sdh、sndh基因，所述外源sdh、sndh基因通过连接肽连接。

2.权利要求1所述的基因工程菌，其特征在于所述sdh、sndh基因核苷酸序列如KVU-0203、NCBI登陆号为AEM40042.1，KVU-0095NCBI登陆号为AEM39934.1所示。

3.权利要求1所述的氧化葡萄糖酸杆菌基因工程菌，其特征在于所述连接肽为GGGGS、GGGGSGGGGS、GGGGSGGGGSGGGGS、PTPTP、PTPTPTPTP、PTPTPTPTPTPTPTP、EAAAK、EAAAKEAAAK、EAAAKEAAAKEAAAK或SSSNNNNNNNNNN。

4.权利要求1所述基因工程菌的构建方法，其特征在于包括如下步骤：

1)根据本NCBI公开的sdh(NCBI登陆号为AEM40042.1）、sndh(NCBI登陆号为AEM39934.1)基因序列设计引物克隆或采用化学全合成法sdh、sndh基因，通过融合PCR将sdh和sndh以不同的连接肽进行连接；

2)将融合后的基因与载体连接得到重组表达载体；

3)将得到的重组表达载体转化氧化葡萄糖酸杆菌后得到产2-KLG的氧化葡萄糖酸杆菌基因工程菌。

5.权利要求1所述氧化葡萄糖酸杆菌基因工程菌在发酵生产2-KLG中的应用。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于具体步骤为：将所述氧化葡萄糖酸杆菌基因工程菌接种于装有50mL液体培养基(含有终浓度75μg/mL氨苄青霉素)的500mL双刺摇瓶中，30℃旋转式摇床200r/min振荡培养至对数生长期，按15%(v/v)接种量转接至终浓度75μg/mL氨苄青霉素的新鲜培养基，再培养至对数生长期，按15%(v/v)接种量转接发酵培养基，30℃，200r/min，发酵168h。