[发明专利]一种用于治疗禽类病毒性疾病的复方注射液及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于兽用注射液技术用于，具体涉及一种用于治疗禽类病毒性疾病的复方注射液，同时还涉及一种用于治疗禽类病毒性疾病的复方注射液的制备方法。

背景技术

近年来，传染病的发生与流行已成为阻碍我国畜牧业快速发展的重要因素，而禽类病毒性疾病是制约家禽养殖业发展的重要因素之一，给养禽业造成巨大经济损失，如禽流感、新城疫等。尽管多数病毒性疾病可用疫苗免疫预防，但效果不甚理想，家禽生产中因漏免或免疫失败导致疫情爆发情况时有发生。目前国内外应用于禽类病毒性疾病的化学药物主要是金刚烷胺和利巴韦林制剂，临床疗效不确切，而且存在如药物残留、影响蛋禽产蛋率恢复等毒副作用。治疗手段和方法的缺乏、化学药物残留较为严重以及人类对畜禽产品食用安全的高度关注，使得疗效优良、无毒副作用、无残留、绿色环保的兽用抗病毒药物的研发备受关注。

生物制品-基因工程禽α干扰素注射液是无毒、无害、无残留的生物制品，对抑制病毒的复制和提高机体免疫力方面有一定的功效；但是干扰素不直接杀伤或抑制病毒，而是在细胞感染病毒后，与未感染的细胞上的相关受体作用，使这些细胞合成抗病毒蛋白，防治进一步感染，从而起到抗病毒的作用，但干扰素对已感染的细胞没有帮助，并且其必须再局部细胞中达到较高的浓度才能诱导宿主细胞合成抗病毒蛋白。因此，现有的禽α干扰素注射液普遍存在起效慢、疗效有限的问题，还不能满足使用的需求。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于治疗禽类病毒性疾病的复方注射液，解决现有禽α干扰素注射液存在的起效慢、疗效有限的问题。

本发明的第二个目的是提供一种用于治疗禽类病毒性疾病的复方注射液的制备方法。

为了实现以上目的，本发明所采用的技术方案是：一种用于治疗禽类病毒性疾病的复方注射液，包括以下重量份数的原料：黄芪提取液2～4份、鸡α-干扰素注射液6～8份。

所述黄芪提取液是由以下方法制备的：

1）将黄芪粉碎至颗粒粒径为250～300μm，按照黄芪与水的质量比为1:6～10的比例将黄芪浸于蒸馏水中，在60～75℃条件下进行恒温微波提取，得混合物A；

2）将混合物A进行离心分离，取上清液，用活性炭进行脱色，得混合物B；

3）将混合物B浓缩至比重为1.15～1.25，得混合物C；

4）向混合物C中加入6～8倍体积量的乙醇溶液，搅拌使其混合均匀后，进行离心分离，取沉淀物并用蒸馏水稀释至比重为1.05～1.15，得混合物D；

5）将混合物D进行凝胶层析，收集吸收峰为280nm的层析后洗脱液，即得黄芪提取液。

步骤1）中所述微波提取的功率为250W，重复提取3～4次，每次提取时间为11～15min。

步骤2）中所述离心分离的转速为3000～5000rpm，时间为12～16min；步骤4）中所述离心分离的转速为3000～5000rpm，时间为12～16min。

步骤4）中所述乙醇溶液中乙醇的质量分数为70%～95%。

步骤5）中所述凝胶层析所用凝胶为葡聚糖凝胶，层析柱的内径与高度比为1:30～50；所述凝胶层析的洗脱液为蒸馏水，流速为0.3～0.6ml/min。

本发明的用于治疗禽类病毒性疾病的复方注射液，所述鸡α-干扰素注射液可为市售鸡α-干扰素注射液产品，或通过以下方法制备。

所述鸡α-干扰素注射液是由以下方法制备的：

a.取含有重组鸡α-干扰素蛋白的菌液，离心收集菌体，用PBS缓冲液洗涤后，再用PBS缓冲液重悬，超声使菌体破壁后，离心并收集沉淀物；

b.将步骤a所得沉淀物用PBS缓冲液洗涤后，用变性缓冲液溶解包涵体，离心收集上清液，得变性蛋白溶液；

c.将步骤b所得变性蛋白溶液加入复性缓冲液中，4℃静置48h后，离心收集上清液，得含有重组鸡α-干扰素蛋白的溶液；

d.从重组鸡α-干扰素蛋白的溶液中收集重组鸡α-干扰素蛋白，进行蛋白处理后，加入保护剂溶液进行混合，使重组鸡α-干扰素的含量为10⁸～10⁹IU/100ml，即得鸡α-干扰素注射液；所述保护剂溶液可为所有可用于制备鸡α-干扰素注射液的添加剂组合溶液；