[发明专利]还原敏感偶氮连接单元的合成及其在DNA测序中的用途

权利要求书

1.一种还原敏感偶氮连接单元，其结构式如式(I)所示：

其中m为0～44中任一整数，n为0～44中任一整数。

2.如权利要求1所述的还原敏感偶氮连接单元，其特征在于，所述m为0～10中任一整数，n为0～10中任一整数。

3.如权利要求2所述的还原敏感偶氮连接单元，其特征在于，所述m=1，n为0～10中任一整数。

4.一种如权利要求1所述的还原敏感偶氮连接单元的合成方法，其特征在于，包括如下步骤：

第一步、在DMF存在的条件下，碳酸钾、化合物E和化合物G反应，得到化合物H所述碳酸钾、化合物E和化合物G的摩尔比为(1.0～1.5)：(3.0～5.5)：1.0；

第二步、在冰浴的条件下，TFA和化合物H反应，得到化合物I所述TFA和化合物H的摩尔比为(3.0～8.0)：1.0。

5.如权利要求4所述的还原敏感偶氮连接单元的合成方法，其特征在于，所述化合物E的合成包括如下步骤：

A、在甲苯存在的条件下，摩尔比为(1.0～3.5)：1.0的48％HBr与化合物A反应，得到化合物B其中，n为0～44中任一整数；

B、在氨水存在条件下，化合物B和氨水反应，得到化合物C所述氨水与化合物B的摩尔比为(1.0～30)：1.0；

C、在水、甲醇和氢氧化钠存在的条件下，BOC酸酐和化合物C反应，得到化合物D所述BOC酸酐和化合物C的摩尔比为(1.0～3.5)：1.0；

D、在三乙胺、DMAP存在的条件下，化合物TsCl和化合物D反应，得到化合物E所述三乙胺、DMAP、TsCl和化合物D的摩尔比为(1.0～5.0)：(0.1～0.5)：(1.0～4.0)：1.0。

6.如权利要求4所述的还原敏感偶氮连接单元的合成方法，其特征在于，所述化合物G的合成包括如下步骤：

在水、甲醇存在的条件下，亚硝酸钠、4-氨基苯乙醇和化合物F反应，得到化合物G所述亚硝酸钠、4-氨基苯乙醇和化合物F的摩尔比为(1.0～4.5)：1.0；(1.0～1.5)；其中，m为0～44中任一整数。

7.一种如权利要求1所述的还原敏感偶氮连接单元在DNA测序中的用途，其特征在于，所述还原敏感偶氮连接单元与核苷酸及荧光素连接得到可逆终端，所述可逆终端用于DNA合成测序。

8.一种可逆终端，其特征在于，所述可逆终端由如权利要求1所述的还原敏感偶氮连接单元与核苷酸及荧光素连接而得。

9.如权利要求8所述的可逆终端，其特征在于，所述连接具体包括如下步骤：

A、以无水DMF为溶剂，在TEA存在的条件下，所述还原敏感偶氮连接单元与TAMRA(5／6)反应，得化合物J所述TAMRA(5／6)、还原敏感偶氮连接单元和TEA的摩尔比为1：(1～3)：(3～10)；

B、在DMAP、DIPEA存在的条件下，化合物J和DSC反应，得到中间体K该中间体K与dUTP(AP3)反应，得到化合物L所述化合物J、DSC、DMAP、DIPEA和dUTP(AP3)的摩尔比为1：(5～12)：(2～3)：(2～4)：(2～8)。