[发明专利]用于DNA断裂和标记的固定化的转座酶复合体

权利要求书

1.一种结合固体基质的哈氏弧菌(Vibrio harveyi)转座酶复合体，所述复合体包含：

包含至少一个哈氏弧菌转座酶的转座酶组分；

包含至少一个寡核苷酸衔接子的寡核苷酸衔接子组分，

其中每个衔接子包含至少一个双链部分，该双链部分含有所述复合体的转座酶的识别序列，并且

其中每个复合体的所述衔接子中的至少一个结合有特异性结合对的成员；

包含特异性结合对的接头组分，该特异性结合对的一个成员结合于衔接子，且该特异性结合对的另一个成员结合于固体基质；以及

固体基质，

其中当所述复合体包含一个转座酶时，其与一个衔接子结合；而当所述复合体包含多于一个转座酶时，至少两个衔接子结合于这些转座酶。

2.权利要求1的复合体，其中所述复合体包含：

包含两个转座酶的转座酶组分；

包含两个寡核苷酸衔接子的寡核苷酸衔接子组分，

其中每个衔接子包含至少一个双链部分，该双链部分含有所述复合体的转座酶的识别序列，

其中所述衔接子中的一个结合有特异性结合对的成员，并且

其中所述衔接子中的一个结合于一个转座酶，而另一个衔接子结合于另一个转座酶；

包含特异性结合对的接头组分，所述特异性结合对的一个成员结合于衔接子，而该特异性结合对的另一个成员结合于固体基质；以及

固体基质。

3.权利要求1的复合体，其中所述转座酶组分包含两个或更多个不同的转座酶。

4.一种组合物，其包含：

结合固体基质的哈氏弧菌转座酶复合体，其包含：

包含至少一个哈氏弧菌转座酶的转座酶组分；以及

包含至少一个寡核苷酸衔接子的寡核苷酸衔接子组分，

其中每个衔接子包含至少一个双链部分，该双链部分含有所述复合体的转座酶的识别序列，

其中每个复合体的衔接子中的至少一个结合有特异性结合对的成员；

包含特异性结合对的接头组分，该特异性结合对的一个成员结合于衔接子，且该特异性结合对的另一个成员结合于固体基质；和

固体基质，

以及

细胞裂解物；

其中，当所述复合体包含一个转座酶时，其与一个衔接子结合；且当所述复合体包含多于一个转座酶时，至少两个衔接子结合于这些转座酶。

5.权利要求4的组合物，还包含核酸酶抑制剂。

6.权利要求5的组合物，其中所述核酸酶抑制剂是二价阳离子螯合剂。

7.权利要求4的组合物，其中所述复合体包含：

包含两个转座酶单位的转座酶组分；以及

包含两个寡核苷酸衔接子的寡核苷酸衔接子组分，

其中每个衔接子包含至少一个双链部分，该双链部分含有所述复合体的转座酶的识别位点，并且

其中所述衔接子中的一个结合有特异性结合对的成员，该成员结合至结合于固体基质的该特异性结合对的另一个成员，并且

其中一个衔接子结合于一个转座酶，且另一个衔接子结合于另一个转座酶。

8.权利要求4的组合物，其中所述转座酶组分包含两个或更多个不同的转座酶。

9.一种产生或纯化具有DNA断裂活性的结合固体基质的哈氏弧菌转座酶复合体的方法，所述方法包括：

裂解含有至少一个哈氏弧菌转座酶的细胞以生成细胞裂解物；

在细胞裂解物中添加至少一个具有至少一个双链部分的寡核苷酸衔接子，所述双链部分含有至少一个所述哈氏弧菌转座酶的识别序列，且该衔接子结合有特异性结合对的一个成员；以及

允许有充足时间供所述衔接子结合所述哈氏弧菌转座酶，

使所述裂解物与结合有所述特异性结合对的配偶的固体基质接触，

使所述裂解物和固体基质处于允许该特异性结合对成员相互结合的条件下，

由此生成结合固体基质的哈氏弧菌转座酶复合体。