[发明专利]检测DNMT3A突变位点的方法、引物和试剂盒有效
| 申请号： | 201310459210.2 | 申请日： | 2013-09-30 |
| 公开（公告）号： | CN103540659A | 公开（公告）日： | 2014-01-29 |
| 发明（设计）人： | 周晓犊;李文静;王淑一 | 申请（专利权）人： | 武汉艾迪康医学检验所有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 杭州裕阳专利事务所(普通合伙) 33221 | 代理人： | 应圣义 |
| 地址： | 430023 湖北省武汉市江汉经*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 检测 dnmt3a 突变 方法 引物 试剂盒 | ||
1.检测样品DNMT3A第882位多态性突变的引物，其特征在于，所述引物包括一对扩增引物，其碱基序列为：
DNMT3A 882-F: TTCGGCAGAACTAAGCAG
DNMT3A 882-R: GTCCCTTACACACACGCA 。
2.如权利要求1所述的引物，其特征在于，所述引物还包括一对测序引物，其碱基序列为：
DNMT3A 882-F: TTCGGCAGAACTAAGCAG
DNMT3A 882-R: GTCCCTTACACACACGCA。
3.如权利要求1所述的引物，其特征在于，所述多态性突变选自R882H、R882C、 R882P和R882S。
4.一种检测样品DNMT3A第882位多态性突变的方法，其特征在于，所述方法包括：
(1)提取样品中的基因组DNA；
(2)利用一对扩增引物对(1)中的DNA进行扩增，获得扩增产物；
(3)利用一对测序引物对(2)中的扩增产物进行测序，获得所述扩增产物的基因序列；
(4)将(3)中的基因序列与DNMT3A野生型基因序列进行比较，确定所述多态性突变是否存在，其中
所述的一对扩增引物，其碱基序列为：
DNMT3A 882-F: TTCGGCAGAACTAAGCAG
DNMT3A 882-R: GTCCCTTACACACACGCA
所述的一对测序引物，其碱基序列为：
DNMT3A 882-F: TTCGGCAGAACTAAGCAG
DNMT3A 882-R: GTCCCTTACACACACGCA 。
5.一种检测样品DNMT3A第882位多态性突变的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括样品基因组DNA抽提试剂；无水乙醇；检测体系PCR反应液、测序体系反应液、阳性对照品、阴性对照品和空白对照品。
6.如权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述检测体系PCR反应液包括
dNTPs、KOD FX DNA Polymerase和一对扩增引物DNMT3A882-F和DNMT3A882-R，其中
DNMT3A 882-F: TTCGGCAGAACTAAGCAG
DNMT3A 882-R: GTCCCTTACACACACGCA。
7.如权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述测序体系反应液包括测序纯化反应液、EDTA、无水乙醇、75%乙醇、HIDI和一对测序引物DNMT3A882-F和DNMT3A882-R，其中
DNMT3A 882-F: TTCGGCAGAACTAAGCAG
DNMT3A 882-R: GTCCCTTACACACACGCA。
8.如权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述测序纯化反应液包括牛小肠碱性磷酸酶和外切酶I。
9.如权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述阳性对照品为含有DNMT3A序列的溶液，所述阴性对照品为无含有DNMT3A序列的溶液，所述空白对照品为生理盐水或不加任何物质。
10.如权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述多态性突变选自R882H、R882C、 R882P和R882S。
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