[发明专利]一种胰岛素结晶或胰岛素类似物结晶的纯化方法

说明书

本申请要求于2012年9月29日提交中国专利局、申请号为201210380407.2、发明名称为“一种胰岛素结晶及或胰岛素其类似物结晶的纯化方法”的中国专利申请的优先权，其全部内容通过引用结合在本申请中。

技术领域

本发明属于药物化学领域，涉及一种胰岛素结晶或胰岛素类似物结晶的纯化方法。

背景技术

胰岛素是由胰岛β细胞受内源性或外源性物质如葡萄糖、乳糖、核糖、精氨酸、胰高血糖素等的刺激而分泌的一种蛋白质激素，胰岛素是机体内唯一降低血糖的激素，同时促进糖原、脂肪、蛋白质合成。胰岛素于1921年由加拿大人F.G.班廷和C.H.贝斯特首先发现。1922年开始用于临床，使过去不治的糖尿病患者得到挽救。目前临床应用的胰岛素主要都是从猪、牛胰脏中提取的。但由于胰岛素治疗尚有局限性，一种新型胰岛素-胰岛素类似物应运而生。胰岛素类似物指既可模拟正常胰岛素的分泌，同时在结构上与胰岛素也相似的物质，较传统人胰岛素更适合人体生理需要。目前胰岛素类似物主要包括甘精胰岛素、地特胰岛素、赖脯胰岛素、门冬胰岛素和德谷胰岛素。

在胰岛素及其类似物的制备过程中一般都要进行结晶步骤，由于结晶后的胰岛素及其类似物方便保存，因此结晶是现有胰岛素及其类似物的制备工艺中必不可少的一个环节。然而目前胰岛素及其类似物的结晶过程中大多均需添加酚类衍生物等有机溶剂，这些挥发性差且毒性高的有机溶剂的残留会严重影响胰岛素产品的质量。例如苯酚是一种有毒溶剂，挥发性较差，有强腐蚀性，对皮肤、粘膜有强烈的腐蚀作用，同时还会抑制中枢神经系统或损害肝、肾功能。在对目前的胰岛素类似物-甘精胰岛素在中国的两种上市产品进行苯酚分析，均发现有一定含量的苯酚。胰岛素及胰岛素类似物市场巨大，目前未有胰岛素晶体或胰岛素类似物结晶体杂质去除方面的文献报导，因此如何除去胰岛素结晶或胰岛素类似物结晶中残留的挥发性差且毒性高的有机溶剂，提高胰岛素及胰岛素类似物药品的品质是当今技术面临的一大难题。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的是针对现有技术中的问题，提供一种胰岛素结晶或胰岛素类似物结晶的纯化方法，纯化后的胰岛素结晶或胰岛素类似物晶体纯度高，溶剂残留低。

为实现本发明的目的，本发明采用如下技术方案：

一种胰岛素结晶或胰岛素类似物结晶的纯化方法，包括：

步骤1、取待纯化的胰岛素结晶或胰岛素类似物结晶，加入有机溶剂冲洗晶体，搅拌至完全分散后抽滤，收集所得晶体。

步骤2、收集步骤1所得晶体，用有机溶剂淋洗，淋洗结束后完全抽干，进一步干燥即得；

其中，所述待纯化的胰岛素结晶或胰岛素类似物结晶含有酚类衍生物；所述有机溶剂为乙醇、乙腈、正丙醇、正丁醇、异丙醇、丙酮中的一种或几种，或乙醇、乙腈、正丙醇、正丁醇、异丙醇、丙酮中的一种或几种与水的混合物，且混合物中水的含量小于50v/v%；所述冲洗晶体与淋洗晶体的时间之和≤120min。

胰岛素及其类似物属于蛋白质激素，而蛋白类的样品不同于一般化学样品，由于蛋白质具有一定的空间结构，强酸、强碱、重金属盐、尿素、胍、去污剂、三氯乙酸、有机溶剂、高温、射线、超声波、剧烈振荡或搅拌等因素都易使蛋白质发生变性，因此采用常用的去杂方式无法在去除胰岛素结晶或胰岛素类似物结晶中挥发性差且毒性高的有机溶剂的同时保证胰岛素结晶或胰岛素类似物结晶的蛋白活性。

本发明采用易挥发低毒性的有机溶剂冲洗待纯化的胰岛素结晶或胰岛素类似物结晶以除去结晶中残留的大量的挥发性差且毒性相对较高的酚类衍生物等有机溶剂杂质，进一步用易挥发低毒性的有机溶剂淋洗胰岛素结晶或胰岛素类似物结晶，以彻底除去结晶中残留的微量的挥发性差且毒性高的有机溶剂，淋洗结束后完全抽干胰岛素结晶或胰岛素类似物结晶然后通过干燥彻底地去除冲洗加淋洗引入的挥发性好的有机溶剂，从而解决结晶中不易挥发的有机溶剂残留的问题。本发明所述纯化方法整个过程均在常温或低温下操作，并且用有机溶剂冲洗加淋洗胰岛素结晶或胰岛素类似物结晶的时间较短，最后通过干燥将易挥发有机溶剂去除，整过程可以有效防止蛋白变性。通过本发明得到的胰岛素结晶或胰岛素类似物结晶终产品相比于未处理过的结晶纯度高，溶剂残留更低，而且颗粒更加均一，分散性更好，便于保存和分装。

作为优选，步骤2所述淋洗晶体为用有机溶剂分次冲洗步骤1所得晶体。所述分次具体为至少两次以上，可以为三次、四次。在每次冲洗晶体的有机溶剂足量的前提下，冲洗的次数越多，结晶中残留的挥发性差且毒性高的有机溶剂去除的越彻底。