[发明专利]高活性α-葡萄糖苷酶抑制肽及其制备方法和用途

权利要求书

1.一种高活性α-葡萄糖苷酶抑制肽，其具有SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列。

2.一种制备权利要求1所述的高活性α-葡萄糖苷酶抑制肽的方法，其特征在于，包括：

利用等电点沉淀法从脱脂山杏仁粕粉中提取蛋白质；

利用碱性蛋白酶对所述蛋白质进行水解，以便获得水解产物；以及

对所述水解产物依次进行超滤处理、凝胶色谱处理、第一反相高效液相色谱处理和第二反相高效液相色谱处理，以便获得所述高活性α-葡萄糖苷酶抑制肽。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，利用等电点沉淀法从脱脂山杏仁粕粉中提取蛋白质包括：

将所述脱脂山杏仁粕粉与水按照重量比1g：14ml的比例进行混合，并使所得混合物在pH9.0、温度37摄氏度的条件下进行水解60min，以便获得碱提产物；

将所述碱提产物进行第一离心，并收集第一离心上清液；

将所述第一离心上清液在等电点pH4.1条件下进行酸沉，以便获得酸沉产物；

将所述酸沉产物进行第二离心，并收集第二离心沉淀物；以及

将所述第二离心沉淀物进行水洗至中性，以便获得所述蛋白质。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，利用等电点沉淀法从脱脂山杏仁粕粉中提取蛋白质进一步包括将所述蛋白质进行真空冷冻干燥。

5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述碱性蛋白酶为Alcalase，利用碱性蛋白酶Alcalase对所述蛋白质进行水解的料液比为50g/L，加酶量为2%（m/m），pH值为9.0，水解温度为50℃，水解时间为6h。

6.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，对所述水解产物依次进行超滤处理、凝胶色谱处理、第一反相高效液相色谱处理和第二反相高效液相色谱处理包括：

利用截留分子量为5000的超滤膜对所述水解产物进行超滤处理，以便得到滤液；

将所述滤液进行凝胶色谱处理并对所得到的各组分进行α-葡萄糖苷酶抑制活性检测，以便将α-葡萄糖苷酶抑制活性最高的组分作为凝胶色谱产物；

将所述凝胶色谱产物进行第一反相高效液相色谱处理并对所得到的各组分进行α-葡萄糖苷酶抑制活性检测，以便将α-葡萄糖苷酶抑制活性较高的组分作为第一反相高效液相色谱处理产物；以及

将所述第一反相高效液相色谱处理产物进行第二反相高效液相色谱处理，以便对所述第一反相高效液相色谱处理产物进行纯化，获得所述高活性α-葡萄糖苷酶抑制肽。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述凝胶色谱处理采用Sephadex G-25Medium柱，流动相为10mM pH7.0的Tris-HCl，流速为1ml/min。

8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述第一反相高效液相色谱处理和所述第二反相高效液相色谱处理均采用Zorbax SB-C18柱，流动相A为0.06%TFA的水，流动相B为0.05%TFA的乙腈，流速为0.8ml/min。

9.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，进一步包括对所述高活性α-葡萄糖苷酶抑制肽，依次进行质谱分析和氨基酸序列测定。

10.权利要求1所述的高活性α-葡萄糖苷酶抑制肽在制备药物或功能食品中的用途，所述药物或功能食品用于降血糖。