[发明专利]一种单模块DNA文库及TALENs识别模块的连接方法

权利要求书

1.TALENs识别模块的连接方法，其特征在于，步骤包括： 

（1）根据所需连接的识别模块的顺序，从单元库中选择识别模块所对应的连接单元；所需连接的识别模块数量至少为1； 

所述的单元库包括4组×k个连接单元；4组连接单元分别识别4种碱基，任意两组连接单元的粘性末端碱基序列一一对应相同； 

所述的连接单元为识别单碱基识别模块及两端经二类限制性内切酶酶切形成的第一粘性末端和第二粘性末端；每组的连接单元包含相同的单碱基识别模块； 

同一组的k个连接单元分为两部分，第一部分包含n个连接单元，第二部分包含m个连接单元；其中n≥2，m=0～n-1； 

第一部分所有连接单元两端的粘性末端碱基序列互不相同，对第一部分所有连接单元进行顺序编号，第i个连接单元的第二粘性末端与第i+1个连接单元的第一粘性末端互补，1≤i≤n-1； 

第二部分连接单元中任意两个连接单元至少一个粘性末端碱基序列不同，且第二部分连接单元中的任意一个连接单元的第一粘性末端与第一部分连接单元中第p个连接单元的第二粘性末端互补，第二粘性末端与第一部分连接单元中第q个连接单元的第一粘性末端互补，其中p≤n-2，3≤q≤n，q-p≥3； 

（2）利用DNA连接酶使连接单元依次连接。 

2.权利要求1所述TALENs识别模块的连接方法，其特征在于，步骤（2）中，用二类限制性内切酶和DNA连接酶，将连接单元重组接入TALENs载体中，用消化线性DNA的酶进行消化处理，得到转录激活子样效应因子核酸酶质粒。 

3.权利要求2所述TALENs识别模块的连接方法，其特征在于，所述的TALENs载体上含有0个、1个或2个识别模块；并且TALENs载体中带有DNA切割蛋白基因，以及位于转录激活子样效应因子氨基酸序列框架N端和C端的碱基序列。 

4.权利要求3所述TALENs识别模块的连接方法，其特征在于，所述的位于转录激活子样效应因子氨基酸序列框架N端和C端的碱基序列 分别如SEQ ID No.43和44所示。 

5.权利要求1所述TALENs识别模块的连接方法，其特征在于，步骤（1）中，所述的单元库中，连接单元连接在载体上。 

6.权利要求1所述TALENs识别模块的连接方法，其特征在于，步骤（1）中，从单元库中选取各识别模块对应的连接单元；第一部分连接单元的数量n为11-18个； 

单元库中所选择连接的连接单元数量a等于n时，从第一部分各组中选取识别相应碱基、序号为1～n的连接单元依次相连； 

单元库中所选择连接的连接单元数量a小于n时，从第一部分各组中选取识别相应碱基、序号为1～b的连接单元，并从第二部分中选取识别相应碱基、并且第一粘性末端能与第一部分b号连接单元第二粘性末端的互补、第二粘性末端能与第一部分第（n+2+b-a）连接单元第一粘性末端互补的连接单元，再与第一部分的第（n+2+b-a）至第n个连接单元相连接，a-1≥b≥1。 

7.权利要求1所述TALENs识别模块的连接方法，其特征在于，步骤（1）中，从单元库中选取各识别模块对应的连接单元；第一部分连接单元的数量n为18个； 

单元库中所选择连接的连接单元数量a小于18时，从第一部分各组中选取识别相应碱基、序号为1～b的连接单元，并从第二部分中选取识别相应碱基、并且第一粘性末端能与第一部分b号连接单元第二粘性末端的互补、第二粘性末端能与第一部分第（20+b-a）连接单元第一粘性末端互补的连接单元，再与第一部分的第（20+b-a）至第18个连接单元相连接，a-1≥b≥1； 

单元库中所选择连接的连接单元数量a=18时，从第一部分各组中选取识别相应碱基、序号为1～n的连接单元依次相连。 

8.权利要求7所述TALENs识别模块的连接方法，其特征在于，所述单元库第一部分编号为1～18的连接单元第一粘性末端及第二粘性末端碱基序列分别如SEQ ID No.5～40的第9～12个碱基所示。