[发明专利]一种用于蛋白质药物传输的仿生纳米载体系统及制备方法

权利要求书

1.一种用于蛋白质药物传输的仿生纳米载体系统的制备方法，其特征在于具体步骤如下：

（1）将两亲性磷酸胆碱化壳聚糖衍生物溶于水，用有机溶剂稀释，配制成两亲性磷酸胆碱化壳聚糖衍生物溶液；

（2）将蛋白质药物溶解于溶剂中，配制成蛋白质药物溶液；

（3）将步骤（2）配制的蛋白质药物溶液缓慢加入步骤（1）配制的两亲性磷酸胆碱化壳聚糖衍生物溶液中，超声分散，并旋转蒸发成膜；

（4）将步骤（3）所成膜加水搅拌重新分散，得纳米粒子溶液，经离心、沉淀洗涤、干燥，得到用于蛋白质药物传输的仿生纳米载体系统；

步骤（1）中所述两亲性磷酸胆碱化壳聚糖衍生物的分子结构如式I所示：

其中，R为脱氧胆酰基、去羟基胆酰基、胆酰基、胆固醇半琥珀酰基、辛酰基、癸酰基、肉豆蔻酰、棕榈酰基、油酰基或亚油酰基疏水基团中的至少一种；R的取代度为0.8%～12%，磷酸胆碱基团的取代度为20%～90%。

2.根据权利要求1所述的用于蛋白质药物传输的仿生纳米载体系统的制备方法，其特征在于：所述的两亲性磷酸胆碱化壳聚糖衍生物通过下述方法制备获得：

1）将壳聚糖改性得到6-O-三苯基甲醚化壳聚糖，溶于反应介质；加入双取代胆碱膦酸酯，其中6-O-三苯基甲醚化壳聚糖中的氨基与膦酸酯的摩尔比为1：2～10，于0～40℃搅拌反应12～24小时；旋干溶剂，加入甲酸，室温搅拌0.5～2小时；旋干甲酸，加入碱性水溶液，水解0.5～4小时，用去离子水透析，冷冻干燥，得到磷酸胆碱化壳聚糖衍生物；

2）将磷酸胆碱化壳聚糖衍生物溶于pH=2～7的酸性或中性水溶液中，利用N-酰化反应引入疏水基团，控制反应温度在10～40℃，反应24～72小时，控制疏水化试剂与磷酸胆碱化壳聚糖衍生物中氨基的摩尔比为0.05～0.6：1；产物经纯化，干燥，得到两亲性磷酸胆碱化壳聚糖衍生物。

3.根据权利要求2所述的用于蛋白质药物传输的仿生纳米载体系统的制备方法，其特征在于：

步骤1）所述壳聚糖为脱乙酰度70％～100％、平均分子质量5000～100W的壳聚糖；

步骤1）所述的将壳聚糖改性得到6-O-三苯基甲醚化壳聚糖的改性方法为壳聚糖先后通过N-邻苯二甲酰化和6-OH的三苯基氯甲烷醚化，再用水合肼脱去邻苯二甲酰基得到；

步骤1）所述反应介质为二甲基乙酰胺、三乙胺和四氯化碳的混合溶液；其中每100mL二甲基乙酰胺中含有1～10g的6-O-三苯基甲醚化壳聚糖，其中三乙胺、四氯化碳与6-O-三苯基甲醚化壳聚糖的氨基摩尔比为6：4：1；

步骤1）所述双取代胆碱膦酸酯由氯化胆碱和对苯氧基膦酸酯按摩尔比2：1在二甲亚砜/吡啶混合溶剂中反应2小时制得；

步骤1）所述的碱性水溶液为氨水、氢氧化钾或氢氧化钠水溶液中的一种；pH值为10～13。

4.根据权利要求2所述的用于蛋白质药物传输的仿生纳米载体系统的制备方法，其特征在于：步骤2）所述的酸性水溶液为乙酸或盐酸水溶液中的一种；

步骤2）所述的磷酸胆碱化壳聚糖衍生物的浓度为5～20g/L；

步骤2）所述的N-酰化反应为1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐作为偶联剂，将疏水化试剂上的疏水基团通过酰胺键偶联在氨基上；

步骤2）所述的疏水基团为脱氧胆酰基、去羟基胆酰基、胆酰基、胆固醇半琥珀酰基、辛酰基、癸酰基、肉豆蔻酰、棕榈酰基、油酰基或亚油酰基中的至少一种；

步骤2）所述的反应温度为室温；

步骤2）所述的磷酸胆碱化壳聚糖衍生物中氨基、疏水化试剂的羧基和偶联剂的摩尔比为1:0.05～0.6：0.15～0.9；

步骤2）所述的纯化方法为透析；

步骤2）所述的干燥方法为冷冻干燥。

5.根据权利要求1所述的用于蛋白质药物传输的仿生纳米载体系统的制备方法，其特征在于：步骤（1）中所述的两亲性磷酸胆碱化壳聚糖衍生物溶于水形成的水溶液浓度为0.05～10mg/mL；

步骤（1）中所述的有机溶剂为甲醇、乙醇、乙腈或丙酮中的至少一种，有机溶剂与水之体积比为1:1～19:1。