[发明专利]锌离子胶体金层析快速检测试纸条或试纸卡及制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测微量锌离子的器具，特别是涉及一种用于快速检测锌离子的金标试纸条/卡及制备方法，属于免疫学和卫生检验学技术领域。

背景技术

土壤和农产品中的重金属与人类健康密切相关。重金属污染主要是指生物毒性显著的汞、铬、镉、铅以及类金属砷，还包括具有毒性的重金属铜、钴、镍、锡等金属污染物。重金属污染不同于其他类型污染，具有隐蔽性、长期性和不可逆转性等特点。随着城市的扩大和大规模工业发展，大量重金属进入环境后，即使浓度很低也可能造成危害，通过饮用水或者通过生物富集以及食物链等方式最终威胁到人体健康。

锌参与体内200 多种酶的合成和活化，是机体新陈代谢的重要物质，是动物生长发育及维持正常生理机能所必须的微量元素，参与蛋白质的合成，促进细胞分裂、生长和再生；但环境污染和饲料、药物添加剂的滥用，造成畜禽产品锌的残留不同程度超标。过量锌是一种作用迅速的中枢神经毒素，通过对神经细胞的直接损害以及对体内各种物质的拮抗而影响脑功能，摄入过量会导致机体代谢紊乱；过量的锌还可明显抑制红细胞的免疫功能，造成雏鸡肝、脾的结构和功能受损。许多实验和流行病学调查已证实，如果锌在体内含量过高，将会抑制吞噬细胞的活性和杀菌力，降低人体免疫功能，抵抗力减弱，对疾病易感性增加。

同时，锌主要来源于采矿、电镀和冶炼行业污染物的排放，水和土壤中的锌污染已经引起环境科学工作者的广泛关注。土壤中锌超过200mg /kg时可能对植物生长造成危害，过量锌可直接导致植物发生锌污染中毒，也可能间接影响植物对于重要营养元素Fe的吸收，进而使植物因缺Fe而引起生长障碍、甚至死亡。在重金属污染的预防和治理中，重金属污染物的监测和识别至关重要。

因此，痕量重金属的定性定量分析在食品和环境检测等方面非常重要。传统的重金属离子检测法有无火焰原子吸收光谱法、电感耦合等离子体质谱法、火焰原子吸收光谱法、伏安法和离子色谱法，以及电热原子化原子吸收光谱法等，检测必须在具备大型分析仪器的重点实验室内进行，无法用于现场检测，且受到费用高、处理量有限和检测时间长等限制，不利于在生产中推广应用，难以适应环境及市场产品的现场抽查及产品进出口快速通关的要求。

因此，建立快速、简便、经济、大批量筛检的锌免疫检测技术，对于减少环境污染、提高食品质量和保障食品安全具有重要意义。

发明内容

本发明要解决的技术问题：提供一种能够快速、简便、敏感、特异的检测锌离子污染残留的锌离子金标试纸条或试纸卡；还提供锌离子金标试纸条的制备方法。

本发明的技术方案：

一种锌离子胶体金层析快速检测试纸条，包括支撑板、样品垫、金标抗体结合垫、包被膜和吸水垫，试纸条两端设有保护膜，所述样品垫、金标抗体结合垫、包被膜、吸水垫依次粘贴于支撑板上；金标抗体结合垫上包被有胶体金标记的能识别锌离子的单克隆抗体或多克隆抗体；包被膜上设有偶联锌离子的载体蛋白溶液印制的隐形检测印迹，以及用羊抗小鼠IgG溶液印制的隐形对照印迹。

所述支撑板为硬质塑胶条或不吸水的硬纸条；所述样品垫和金标抗体结合垫由玻璃纤维棉制成；所述吸水垫由吸水滤纸制成；所述包被膜由硝酸纤维素膜制成；所述载体蛋白为鸡卵清蛋白（OVA）、血蓝蛋白（KLH）或牛血清蛋白（BSA）。

所述保护膜覆盖在样品垫、金标抗体结合垫和吸水垫上，保护膜上印制有样品标记线，该样品标记线偏向样品垫一侧0.3-0.5cm处；隐形检测印迹上偶联六价锌离子的载体蛋白溶液的包被量为1μL/cm，载体蛋白浓度为1mg/mL；隐形对照印迹上羊抗小鼠IgG抗体的包被量为1μL/cm，抗体浓度为1mg/mL；所述隐形检测印迹和隐形对照印迹的排列方式为“︱︱”、“＋＋”或“●●”。

锌离子胶体金层析快速检测试纸条的制备方法，所述制备步骤如下：

（1）偶联锌离子载体蛋白溶液的制备：

称取20mg 载体蛋白溶于1mL、浓度为10mmoL/L、pH值为9.0的N-(2-羟乙基)哌嗪-N'-2-乙烷磺酸的缓冲液中，形成载体蛋白溶液； 称取10mg对氨基苯基-二乙三胺五乙酸溶于1mL二甲基亚飒中，形成金属鳌合剂溶液；取100uL DTPA溶液在搅拌下逐滴加到0.5mL载体蛋白溶液中，用10mol/L的KOH调节其pH至9.0，室温反应24h，形成DTPA-载体蛋白溶液；称取100mg氯化锌溶于100μL浓硝酸中，加纯水溶解得到终体积为1mL、浓度为733.7mmoL/L的Zn²⁺溶液；