[发明专利]一种荚膜红细菌hemA基因的胞内高活性表达方法无效
| 申请号： | 201310449211.9 | 申请日： | 2013-09-27 |
| 公开（公告）号： | CN103468736A | 公开（公告）日： | 2013-12-25 |
| 发明（设计）人： | 林建平;漏佳伟;朱力;吴绵斌;杨立荣;岑沛霖 | 申请（专利权）人： | 浙江大学 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N15/54;C12N9/10 |
| 代理公司： | 杭州求是专利事务所有限公司 33200 | 代理人： | 周烽 |
| 地址： | 310058 浙江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 荚膜 细菌 hema 基因 胞内高 活性 表达 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种荚膜红细菌hemA基因的胞内高活性表达方法，其特征在于，该方法利用E.coli Rosetta(DE3)表达含有较多大肠杆菌稀有密码子的荚膜红细菌hemA基因。
2.根据权利要求1所述的荚膜红细菌hemA基因的胞内高活性表达，其特征在于，该方法包括以下步骤：
（1）从荚膜红细菌的菌液中提取总基因组DNA；
（2）PCR扩增ALA合成酶基因hemA；
（3）采用双酶切法，将扩增得到的ALA合成酶基因与质粒pET28a连接，并转化至DH5α，筛选得到含有重组质粒pET28a-R.C.hemA的阳性克隆；
（4）将重组质粒pET28a-R.C.hemA转化至宿主菌Rosetta(DE3)中，筛选得到工程菌Rosetta(DE3)/pET28a-R.C.hemA；
（5）发酵培养工程菌Rosetta(DE3)/pET28a-R.C.hemA，使其胞内高活性表达荚膜红细菌hemA基因。
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