[发明专利]含BMP-2和ZsGreen1基因的表达载体及其构建方法无效
| 申请号： | 201310446813.9 | 申请日： | 2013-09-26 |
| 公开（公告）号： | CN103525851A | 公开（公告）日： | 2014-01-22 |
| 发明（设计）人： | 岳建辉;赵晓丽;潘浩波;胡庆茂 | 申请（专利权）人： | 深圳先进技术研究院 |
| 主分类号： | C12N15/66 | 分类号： | C12N15/66;C12N15/85 |
| 代理公司： | 深圳中一专利商标事务所 44237 | 代理人： | 张全文 |
| 地址： | 518055 广东省深圳*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | bmp zsgreen1 基因 表达 载体 及其 构建 方法 | ||
1.一种含BMP-2和ZsGreenl基因的表达载体构建方法，包括:
SO1.通过PCR方法将BMP-2基因扩增，得扩增产物;
S02.将所述扩增产物和pIRES2-ZsGreenl载体分别利用XhoI和BamHI酶进行双酶切处理，将所得含BMP-2基因的双酶切产物和含ZsGreenl基因的双酶切产物进行粘性末端连接，
其中所述通过PCR方法将BMP-2基因扩增时使用的引物对为:SEQ ID NO:l和SEQ ID NO:2。
2.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述BMP-2基因包括信号肽、前肽和成熟肽序列。
3.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述粘性末端连接使用E.coli DNA连接酶或T4 DNA连接酶进行。
4.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述PCR方法的反应条件为:
94-95℃预变性2-3分钟，
97-98℃变性10-12秒，55-56℃退火30-40秒，68-70℃延伸90-120秒，扩增25-30个循环，
70-72℃延伸10-12分钟。
5.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，在所述通过PCR方法将BMP-2基因扩增之后还包括对目的DNA序列进行纯化回收的操作。
6.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述粘性末端连接过程中，所述含BMP-2目的基因的双酶切产物与含ZsGreenl基因的双酶切产物的DNA摩尔含量比为3-6:1。
7.如权利要求1-6中任一项所述的构建方法制备的含BMP-2和ZsGreenl基因的表达载体。
8.如权利要求7所述的表达载体用于诱导成骨细胞分化的应用，所述应用包括将所述表达载体转染至骨髓间充质干细胞中的步骤。
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