[发明专利]胸腺嘧啶核苷激酶的ELISA诊断试剂盒

权利要求书

1.胸腺嘧啶核苷激酶的ELISA诊断试剂盒，其特征是，试剂盒内设有样品检测液、阴性对照和阳性对照；所述样品检测液为特异性抗原多肽。

2.根据权利要求1所述的胸腺嘧啶核苷激酶的ELISA诊断试剂盒，其特征是，所述用于样品检测的特异性抗原多肽的制备方法，包括以下步骤：

(1)抗原片段的获得：利用生物信息学方法，在开始的生物信息资源数据库上收集胸腺嘧啶核苷激酶家族同源蛋白质序列，运用多序列比对程序clustalw进行多序列比对分析，胸腺嘧啶核苷激酶多种同源蛋白，寻找胸腺嘧啶核苷激酶最特异性的片段，随后进行抗原表位分析，寻找到了优势特异性TK1的蛋白表达区段Met1-Gln205，并进一步做原核载体的构建与表达纯化；

(2)抗原蛋白的获得：从TK1编码基因调取相对应的基因核酸片段，总长度为702bp，并利用其进行亚克隆构建到原核表达重组质粒pGEX-4T-2a或其它原核表达载体中，通过调整诱导表达条件，诱导表达后可以收集菌体，并通过蛋白质纯化，得到高纯度的重组蛋白质，此蛋白质为N端谷胱转移酶融合蛋白，其重组蛋白通过SDS-PAGE鉴定纯度；

(3)特异性抗体制备：将原核表达纯化得到的纯度在95％以上的重组蛋白除去内毒素，再进行动物免疫，通过三次腹腔注射重组蛋白使小鼠对其产生免疫反应，取小鼠腹水纯化得到抗血清，经过进一步的纯化与分离得到多克隆抗体，将TK1(1-205)特异性抗原免疫小鼠后，取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞进行细胞融合，经多次筛选获得阳性的单克隆细胞株，并进行腹水生产和单克隆抗体制备；

(4)效价和特异性的评价：采用ELISA技术和Western blot技术对制备的单克隆抗体和多克隆抗体进行效价以及特异性的评价；

(5)包装：运用TK1的ELISA试剂盒将获得的特异性抗原多肽按照标准包装形式统一规格。