[发明专利]一种内皮克隆形成细胞的分离方法有效
| 申请号： | 201310436011.X | 申请日： | 2013-09-23 |
| 公开（公告）号： | CN103525753A | 公开（公告）日： | 2014-01-22 |
| 发明（设计）人： | 赖真阳;陈强;李雪莲;钟立武 | 申请（专利权）人： | 四川新生命干细胞科技股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/071 | 分类号： | C12N5/071 |
| 代理公司： | 成都高远知识产权代理事务所(普通合伙) 51222 | 代理人： | 李高峡;张娟 |
| 地址： | 610037 四*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 内皮 克隆 形成 细胞 分离 方法 | ||
1.一种内皮克隆形成细胞的分离方法，其特征在于：包括如下步骤：
（1）酶消化：取脐带静脉，用碱性或中性缓冲液灌注冲洗至流出的液体透明，灌入胶原酶或者胶原酶与胰酶的混合酶，封闭两端，消化15～60min，打开两端，收集消化液；
（2）机械刮取：将脐带静脉剖开，暴露出脐带静脉内表面，用细胞刮刮取脐带静脉内表面3～10分钟，再用碱性或中性缓冲液洗涤，收集洗涤液；
（3）将步骤（1）的消化液和步骤（2）的洗涤液合并，离心，去上清，即可。
2.根据权利要求1所述的分离方法，其特征在于：步骤（1）中，所述碱性或中性缓冲液是PBS缓冲液、DPBS缓冲液或者Hanks缓冲液。
3.根据权利要求1所述的分离方法，其特征在于：步骤（1）中，所述胶原酶是II型胶原酶。
4.根据权利要求1所述的分离方法，其特征在于：步骤（1）中，所述胶原酶的浓度为0.2%，所述胰酶的浓度为0.5%，胶原酶与胰酶的体积比为1:1。
5.根据权利要求1所述的分离方法，其特征在于：步骤（1）中，所述消化的温度为37℃。
6.根据权利要求1所述的分离方法，其特征在于：步骤（1）中，所述消化的时间是15～30min。
7.根据权利要求1所述的分离方法，其特征在于：步骤（2）中，所述刮取的时间是5分钟。
8.根据权利要求1所述的分离方法，其特征在于：步骤（2）中，所述碱性或中性缓冲液是PBS缓冲液、DPBS缓冲液或者Hanks缓冲液。
9.根据权利要求1所述的分离方法，其特征在于：步骤（2）中，所述缓冲液的用量为脐带静脉长度的0.5～1.5倍（ml/cm）。
10.根据权利要求9所述的分离方法，其特征在于：所述缓冲液的用量为脐带静脉长度的1倍（ml/cm）。
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