[发明专利]医药制造方法

说明书

本申请是申请号为200780035985.X、申请日为2007年7月31日、发明名称为“医药制造方法”的发明专利申请的分案申请。

技术领域

本发明涉及制造用于治疗哺乳动物的病毒感染和癌症的医药组合物的方法。

背景技术

寡腺苷酸合成酶(OAS)蛋白是以催化腺苷的2’、5’寡聚物(2-5As)的能力为特征的干扰素诱导蛋白。OAS蛋白介导哺乳动物细胞的抗病毒活性和促细胞凋亡活性。我们先前已证明OAS基因家族成员的突变与人类群体的病毒感染抗性有关。我们已描述使用OAS基因和蛋白作为医药组合物的方法且进一步描述了具有改进的药物性质的OAS基因和蛋白的变异、经修饰和衍生形式。

霍凡尼斯恩(Hovanessian)等人，EMBO 6：1273-1280(1987)发现经干扰素处理的人类细胞含有多种对应于具有40(OAS1)、46(OAS1)、69(OAS2)和100(OAS3)kD的蛋白质的OAS同种型。玛丽(Marie)等人，生物化学与生物物理学研究通讯(Biochem.Biophys.Res.Commun.)160：580-587(1989)产生对p69(69kD OAS2)具有高度特异性的多克隆抗体。通过用抗p69抗体筛选经干扰素处理的人类细胞表达文库，玛丽(Marie)和霍凡尼斯恩(Hovanessian)，生物化学杂志(J.Biol.Chem.)267：9933-9939(1992)分离了部分OAS2 cDNA。其用所述部分cDNA筛选其它文库且回收编码两种OAS2同种型的cDNA。较小同种型是由3’非翻译区的长度不同的两种mRNA编码。

Northern印迹分析揭示，OAS2在人类细胞中是表达为四种干扰素诱导mRNA。预测的OAS2蛋白具有常见的683-氨基酸序列和不同的3’末端。根据活体外转录/翻译产物的SDS-PAGE，两种同种型具有69kD和71kD的分子质量。这两种同种型都展现活体外OAS活性。序列分析指示，OAS2含有两个由脯氨酸富集的推定连接区隔开的OAS1同源域。N-末端域和C-末端域与OAS1分别41％和53％一致。同样地，OAS3含有OAS1同源域的三个串联单元。

通过荧光原位杂交且通过包括在定位克隆内，霍夫纳尼安(Hovnanian)等人，基因组(Genomics)52：267-277(1998)确定OAS1、OAS2和OAS3基因与12q24.2上的130kb区团簇在一起。2-5As结合且激活核糖核酸酶L，而核糖核酸酶L降解病毒和细胞RNA，从而导致抑制细胞蛋白质合成和削弱病毒复制。

称为OASL的第四人类OAS基因与OAS1、OAS2和OAS3的不同之处在于OASL缺乏酶活性。OASL基因编码双域蛋白质，所述蛋白质包含与泛素的串联重复单元的同源164氨基酸C-末端域融合的OAS单元。(艾斯凯尔森(Eskildsen)等人，核酸研究(Nuc.Acids Res.)31：3166-3173，2003；卡库塔(Kakuta)等人，干扰素与细胞因子研究杂志(J.Interferon & Cytokine Res.)22：981-993，2002。)

本发明通过提供制造用于多种用途、包括用于医药组合物中的寡腺苷酸合成酶蛋白的方法来满足所属领域的需求。

发明内容

本发明涉及制造诸如哺乳动物或人类寡腺苷酸合成酶蛋白等寡腺苷酸合成酶蛋白的方法。

本发明进一步涉及测试许多所制造的OAS蛋白的比活性和抗病毒效价的方法。

本发明进一步涉及验证OAS蛋白制造过程的方法。

本发明进一步涉及药品、活性医药成分和医药组合物的制造。

本发明涉及在良好制造规范(Good Manufacturing Practices)指导下OAS蛋白的制造。在另一个实施例中，本发明涉及用于监测和验证在良好制造规范指导下OAS蛋白制造的分析方法。

本发明涉及编码OAS蛋白的核酸在制造过程中的用途。在另一个实施例中，制造过程是药物或活性医药成分制造过程。