[发明专利]一种解吸附方法及其应用

说明书

技术领域：

本发明涉及一种解吸附方法，用于佐剂吸附剂型产品的解吸附。本发明特别涉及的解吸附方法可以排除佐剂吸附对产品检验造成的影响，用于吸附剂型产品的检定。

背景技术：

佐剂可以有效增强抗原的免疫原性，起到减少抗原用量，增强免疫反应的作用。铝佐剂是目前使用最广的佐剂之一，也是国内目前唯一批准使用于人体的佐剂，广泛使用于人用疫苗产品。国内使用的乙型肝炎疫苗、无细胞百白破疫苗、吸附破伤风疫苗、吸附白喉疫苗等都是含铝佐剂的吸附疫苗。铝佐剂也广泛应用于一些新兴的疫苗，如目前国际上销售额最大的多价肺炎球菌结合疫苗就采用磷酸铝作为佐剂，国内新批准的戊型肝炎疫苗也是佐剂吸附剂型。

由于佐剂的存在，一些疫苗质量检定项目的检测会受到干扰，甚至无法开展。因此，有些本应在终产品检定的项目被前置到半成品或原液中开展，导致产品的最终质量控制存在风险。解吸附可以将吸附于佐剂上的抗原游离下来，用于检测和分析。Katz（Desorption of porcine parvovirus from aluminum hydroxide adjuvant with subsequent viral immunoassay or hemagglutination assay，Vet Res Commun.1987;11(1):83-92.）曾采用1.2M的磷酸钾洗脱氢氧化铝佐剂吸附的猪细小病毒抗原，将洗脱液浓缩后对病毒进行检测，这种方式是利用磷酸根对氢氧化铝佐剂等电点的影响，进而影响了对抗原的吸附（Rinella等.Effect of anions on model aluminum-adjuvant-containing vaccines.J Colloid Interface Sci.1995;172:121–30.）。还有采用表面活性剂进行洗脱解吸附的，如采用SDS、Triton X-100等。Sizer等在其专利中，对上述类似解吸附条件进行了深入研究（Assays for adsorbed influenza vaccines,Pub.N0.:US2011/0045457A1），获得了较佳的吸附流感疫苗解吸附条件。但以上方法都基于将抗原和佐剂颗粒分开，存在分离不彻底的缺陷，造成对检测结果的低估，而且方法更适合于氢氧化铝佐剂。《中华人民共和国药典》（2010年版三部）中采用枸橼酸钠或碳酸钠溶解佐剂的方法也只适用于氢氧化铝佐剂。

本发明采用一种全新的方法，以碱溶液将含有佐剂的疫苗溶解，再采用含金属络合剂的酸性化学试剂中和，被中和溶液不再形成佐剂颗粒，从而不会对产品检定产生影响。本方法尤其适用于含磷酸铝佐剂的疫苗产品的处理。

发明内容：

本发明提供一种含有佐剂的疫苗产品的解吸附方法，所述方法包括以下步骤：

步骤1、用碱溶液溶解含有佐剂的疫苗；

步骤2、用含金属螯合剂的酸性试剂中和上述溶液；

其中步骤1所述碱溶液为碱性物质配制的溶液，所述碱性物质选自无机碱或有机碱，可以采用一种，也可以是多种碱的混合物。无机碱是指碱金属及碱土金属的氢氧化物（包括氢氧化铵），优选氢氧化钾和氢氧化钠，有机碱是指分子中含有氨基的有机化合物，如乙二胺，三乙胺等。所述氢氧化钾，氢氧化钠，使用时配制成0.001M～26M的水溶液，优选0.1M～10M的水溶液。

所述含有佐剂的疫苗选自含有铝佐剂的疫苗，如含有磷酸铝、硫酸铝、氢氧化铝、以及含有铝盐成分的其它复合佐剂的疫苗。优选含有磷酸铝佐剂的疫苗，所述疫苗包括人用和兽用疫苗，尤其是人用疫苗。所述疫苗选自：乙型肝炎疫苗、无细胞百白破疫苗、吸附破伤风疫苗、吸附白喉疫苗、多价肺炎球菌结合疫苗、多价流脑结合疫苗、b型流感嗜血杆菌结合疫苗等。

所述碱溶液的用量是疫苗用量的0.001-100倍。

所述碱溶液的配制方法如下：

称取一定量的碱性物质，用适当溶剂溶解至特定浓度。

其中步骤2所述含金属螯合剂的酸性试剂选自：含有EDTA、柠檬酸、氨基乙酸、氟离子、氯离子的酸溶液，优选含有EDTA和柠檬酸的酸溶液，最优选的是含有柠檬酸的溶液。

其中EDTA可以是EDTA或其二钠盐，使用时用酸配制成浓度在1M以下的EDTA或其二钠盐的酸溶液。所述含有柠檬酸的溶液是将柠檬酸直接用水或其它含盐溶液配制成溶液，浓度为0.001M～7M，优选0.1M～5M。

所述柠檬酸水溶液的配制方法如下：

称取一定量的柠檬酸，用水溶解至特定浓度。