[发明专利]一种从紫菜酶解产物中分离α-葡萄糖苷酶抑制剂的方法

说明书

技术领域

一种从紫菜酶解产物中分离α-葡萄糖苷酶抑制剂的方法，属于生物制品分离纯化技术领域。

背景技术

糖尿病是一种常见的由生活环境和遗传因素等引起，以高血糖为特征的内分泌代谢疾病。根据世界卫生组织（WTO）统计，全球约有3.5亿多人饱受糖尿病痛苦的折磨，我国糖尿病人约占全世界糖尿病人口的三分之一，预计到2025年人数将增加一倍。糖尿病及其并发症已经成为继肿瘤和心血管疾病之后人类第三大杀手。医学界通常将其分为两大类：Ⅰ型糖尿病和Ⅱ型糖尿病。糖尿病的发病机制尚未阐述全面，但主要原因可以归结为胰岛素的分泌异常，临床上主要表现为三多一少的症状。目前糖尿病基本无法治愈，主要通过控制血糖在一个良好的水平，有效减少糖尿病病人的并发症。

α-葡萄糖苷酶（简称，EC 3.2.1.20）为一种低聚糖水解酶，在细胞外主要作用于多糖末端的非还原性α-葡萄糖苷键，产生α-D-葡萄糖。通常把它归为淀粉水解酶中的第三类，是人类在体内水解淀粉等糖类物质的关键酶，并作为医学上治疗糖尿病的重要标靶。α-葡萄糖苷酶抑制剂是上个世纪末出现的一类治疗糖尿病的新型降血糖药物，主要作用机制是通过竞争性抑制小肠上段细胞表面的α-葡萄糖苷酶活性，减缓碳水化合物的分解吸收，增强对胰岛素刺激作用的敏感性并减少胰腺刺激的作用，进而达到降低餐后血糖和治疗糖尿病的目的。目前已被用作Ⅱ型糖尿病的抑制糖苷酶水解的临床药物有：阿卡波糖( Acarbose )、伏格列波糖( Voglibose )、乙格列酯( Emiglitate )、米格列醇( Miglitof )等。国内对α-葡萄糖苷酶抑制剂药物的需求量巨大，主要依靠进口，但来源稀少，价格昂贵，给广大糖尿病患者带来了沉重的经济压力。所以迫切需要来源广泛，价格低廉的α-葡萄糖苷酶抑制剂药物。我国海洋资源丰富，充分利用海洋资源研发α-葡萄糖苷酶抑制剂意义重大。

紫菜( Porphyra yezoensis )为红藻门、原红藻纲、红毛菜科、紫菜属，具有很高的食用和药用价值，可以治疗甲状腺肿大，降低胆固醇和预防动脉粥样硬化。我国紫菜原料来源广泛，优质紫菜主要用于制成海苔等休闲食品，末水紫菜口感差，售价很低，但其蛋白质含量仍然在37%左右、另外还含有多糖、纤维、VC、各种矿物质等。继续对低值末水紫菜进行综合利用和深加工具有深远意义。

紫菜经过酶解的产物主要以小分子紫菜多肽为主，附带有多种功效成分共存的蛋白质。这些物质对人体有多方面的生理功能，在医疗卫生，食品保健，食品加工等领域具有广阔的开发潜能，为紫菜的深加工指明了方向，扩大了紫菜的应用前景。

发明内容

本发明目的是提供一种从紫菜酶解产物中分离α-葡萄糖苷酶抑制剂的方法，从天然产物中分离出一种天然α-葡萄糖苷酶抑制剂，该方法操作简单、安全性高，成本低。

本发明的技术方案：一种从紫菜酶解产物中分离α-葡萄糖苷酶抑制剂的方法，步骤为：

（1）α-葡萄糖苷酶抑制剂的提取：

(a) 末水条斑紫菜：启东市海鲜市场。

(b) 沸水浴热处理：末水条斑紫菜研磨成粉后，以pH7.0 Na₂HPO₄-KH₂PO₄缓冲液为介质，底物与缓冲液的质量比为1:25～33，沸水浴热处理15 min。

(c) 复配酶解紫菜：加入中性蛋白酶( E/S=8×10⁴ U/g )，50℃水解7 h，沸水浴灭酶15 min；调节pH8.5，加入固体氨肽酶( E/S=28 U/g )和碱性蛋白酶( E/S=8×10⁴ U/g )，50℃水解3 h，沸水浴灭酶15 min；加入乙醇至终浓度为60%。室温静置过夜，8000 r/min离心10 min，得到的上清液为含α-葡萄糖苷酶抑制剂的混合物。

（2）α-葡萄糖苷酶抑制剂分离纯化：将含α-葡萄糖苷酶抑制剂的混合物通过活性炭脱色，再将该活性炭脱色液依次经过SP Sepharose High Performance 阳离子交换层析、Sephadex G-10凝胶层析和Mono Q 阴离子交换层析进一步分离纯化后，得到α-葡萄糖苷酶抑制剂。