[发明专利]一种基于微载体细胞的细胞固定相及其制备方法

权利要求书

1.一种基于微载体细胞的细胞固定相，其特征在于，包括色谱柱，色谱柱中填充有作为色谱固定相的微载体细胞；所述的微载体细胞是将贴壁生长于微载体表面的细胞，通过交联链固定于微载体表面而得到的。

2.如权利要求1所述的基于微载体细胞的细胞固定相，其特征在于，所述的微载体为葡聚糖凝胶制备的微载体Cytodex，所述的细胞为细胞膜上表达有能够与药物结合的受体的细胞，所述的交联链是利用多聚甲醛与细胞中的蛋白质末端基团之间形成交联链，而固定于微载体表面。

3.如权利要求1所述的基于微载体细胞的细胞固定相，其特征在于，所述微载体细胞通过湿法装入色谱柱中。

4.一种基于微载体细胞的细胞固定相的制备方法，其特征在于，包括以下操作：

1）将微载体置于硅化的培养容器中，活化后灭菌，然后加入DMEM培养基过夜，临用前吸弃原培养基，换37℃温热的DMEM培养基，制成微载体悬液；

2）将微载体悬液置入培养容器中，接种细胞悬液，然后加入DMEM培养液；将培养容器直立于CO₂培养箱中培养2～3h，去除旋转摇动1～2min；之后每1～2小时摇一次，每12～24h更换一次培养基；

3）待细胞贴壁生长于微载体后，取处于对数期贴壁生长于微载体上的细胞悬液，加入质量浓度4%的多聚甲醛溶液，室温固定15～30min后，将细胞通过交联链固定于微载体表明，得到微载体细胞；

4）将微载体细胞作为色谱固定相，湿法装入色谱柱中，得到用于药物筛选的细胞色谱柱。

5.如权利要求4所述的基于微载体细胞的细胞固定相的制备方法，其特征在于，所述的微载体为葡聚糖凝胶制备的微载体Cytodex，直径为100～250μm，其活化为：将微载体置于硅化的容器中，用PH=7.4的PBS冲液洗涤后，更换新鲜的PBS浸泡过夜；

活化后的灭菌为高压灭菌，灭菌后换新鲜的培养基浸泡过夜，临用前吸弃原培养基，换37℃温热的DMEM培养基，并调整微载体的含量为10～20mg/ml。

6.如权利要求4或5所述的基于微载体细胞的细胞固定相的制备方法，其特征在于，所述的DMEM培养基中还添加有0.3mg/l的G418，以及体积浓度10%的FBS。

7.如权利要求4或5所述的基于微载体细胞的细胞固定相的制备方法，其特征在于，所述的容器的硅化为：将容器洗净烘干，浸泡于质量浓度5%的二甲基硅油-乙酸乙酯溶液中均匀硅化4h后，捞起空干，以超纯水洗3次并浸泡过夜，烘干备用。

8.如权利要求4所述的基于微载体细胞的细胞固定相的制备方法，其特征在于，所述的细胞接种是将细胞密度为1×10⁵～1×10⁷个/ml的细胞悬液，吸取2～5ml接种到已加入微载体悬液的培养瓶中，再加入10～15ml的DMEM培养基，终体积为15～20ml。

9.如权利要求4所述的基于微载体细胞的细胞固定相的制备方法，其特征在于，所述的多聚甲醛溶液是用PBS配制的，加入多聚甲醛溶液后，多聚甲醛与细胞中的蛋白质末端基团之间形成交联链，将贴壁生长于微载体上的细胞固定于微载体表面。

10.权利要求1所述的基于微载体细胞的细胞固定相在筛选载体细胞能够保留药物中的应用。