[发明专利]一种花青素脂质体的制备方法

说明书

一、技术领域

本发明涉及天然抗氧化剂花青素的脂质体的制备方法。

二、背景技术

花青素在自然界中的分布广泛，已发现存在于自然界中的花青素有600多种，大量体外研究表明，花青素具有比维生素E等常见的抗氧化剂更高的抗氧化能力，较强的抗炎，抗菌及抑制癌细胞生长能力，因此被认为可以用于降低由氧化性损伤所引起的慢性疾病，如心血病、肿瘤、神经退性疾病、糖尿病的患病风险的作用，这些作用引起了药学、营养学及食品学界的广泛关注和研究。

然而，相比较其它植物黄酮，花青素稳定性差，对温度、pH、光、金属离子等外在因素敏感，尤其受pH值的影响很大，花青素一般在pH1～2以下以2一苯基苯并吡喃型阳离子的结构稳定存在，随着pH值的增加，其主体结构逐渐过渡到查尔酮、醌型碱的结构，稳定性也迅速减小，容易被氧化降解。此外，近年来对花青素体内生物可利用度的研究结果也不容乐观，可能原因有二，一是花青素在生理条件下不稳定，二是其较强亲水性及较大分子量导致其不易被胃肠道吸收。稳定性差和生物可利用率差严重影响了花青素的广泛应用，随着近年来人们对花青素在功能食品、保健食品的应用，期望解决这个问题的心情也越来越迫切。

朱树华等将紫薯花青素与甘薯、小麦和玉米淀粉混合碾磨，再载入明胶胶囊制备得到了紫薯花青素胶囊，但该发明未说明中花青素在体内的稳定性和生物可利用度。如何在提高花青素的稳定性同时提高其生物可利用度一直是个难题。

脂质体是一种磷脂在水相中形成的具有类似生物膜结构的双分子层结构的小囊，最早是由英国学者Bangham在1965年将磷脂分散在水中进行电镜观察时发现的。1972年Gregoriadis和Ryman提出用脂质体作为β-半乳糖苷酶载体治疗糖原累积疾病后，此后人们开始研究应用脂质体作为不稳定的药物的包埋使其稳定化和通过脂质体载体控制药物释放。脂质体包埋技术较为成熟，部分脂质体药物已有临床应用。制备脂质体常用的方法有手摇法、超声法、冻干再水化法、表面活性剂去除法、冷冻熔融法、逆向蒸发法和pH梯度法等。逆相蒸发法由于适用于包埋水溶性物质且可制得大单室脂质体的特点，成为包埋黄酮类化合物最常用的方法之一。鉴于一般的脂质体在生理条件(即pH中性)下会比较稳定，而花青素在pH＜2时比较稳定，本发明采用pH梯度法、逆向蒸发法两者相结合的方法制备获得花青素脂质体混悬液，大大提高了花青素的稳定性，同时采用加入冻干保护剂进行冷冻干燥，制备得到了花青素脂质体的冻干粉，便于保存和作为食品、医药保健品和化妆品的原料进行使用。

三、发明内容

技术问题

本发明的目的是为了解决游离花青素存在的稳定性差及生物可利用率差的问题，提供了一种花青素脂质体的制备方法。

技术方案

本发明的制备花青素脂质体的方法是通过以下步骤实现的：

(1)成膜：按摩尔比为1：1～5：1的比例称取一定量的磷脂和胆固醇置于梨形烧瓶中，并按1：1～10：1的比例加入氯仿或乙醚等有机溶剂溶解，并在10℃～35℃下通过减压旋转蒸发除去有机溶剂，在瓶内壁上形成一层均匀的浅黄色膜脂；

(2)花青素酸性溶液的配置：将花青素与花青素稳定剂按重量比为20：5-20：1的比例混合，加入pH2的磷酸缓冲溶液溶解。

(3)超声波处理：向形成脂膜的梨形烧瓶中重新加入一定量的乙醚等有机溶剂将膜脂溶解，再按磷脂与花青素的重量比为10：1-50：1加入花青素酸性磷酸盐缓冲溶液，并震荡混合，得混合液；将_混合液短时间歇超声处理3～10min，使其形成外观均匀，且在20min内不发生分层现象的乳状液；

(4)逆向蒸发：上述乳状液置于梨形瓶中，并在15℃～35℃的水浴中，减压旋转蒸发直至有机溶剂去除后形成的凝胶半固态脂质体从瓶底脱落；

(5)水合：向通过逆向蒸发得到的脂质体中加入—定体积的pH为7的磷酸盐缓冲液，室温下震荡5～10min后得粗脂质体混悬液。

(6)粒径控制：将粗脂质体挤压通过0.45μm、0.25μm或0.10μm等不同孔径的滤膜，或循环高压均质，以获得不同粒径范围的花青素脂质体。

(7)冷冻干燥：在上述脂质体悬浮液中按3-20g／100ml加入冻干保护剂，然后放入-65℃下预冷冻24小时后用冷冻干燥剂进行冷冻干燥，得到花青素脂质体的冻干粉。

有益效果

(1)脂质体具有提高芯材稳定性，控制芯材释放，屏蔽不良味道与气味的作用，本发明采用pH梯度结合逆相蒸发法制备花青素脂质体，将花青素包埋在内水相中，降低了花青素受外界环境影响的敏感性，使花青素更加稳定。